酶解豬皮明膠制備抗疲勞肽及其功效研究.pdf

1、在食品行業(yè)中，豬皮明膠多被用作穩(wěn)定劑、乳化劑等來改善食品的原有形態(tài)、風(fēng)味等，本文針對豬皮明膠在食品行業(yè)應(yīng)用功能單一、附加值不高等局限性，對其進(jìn)行酶法高效利用，采用超濾技術(shù)對酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，利用體外化學(xué)模型評價(jià)其抗氧化活性，并結(jié)合動物模型評價(jià)其抗疲勞功效，以期為今后抗疲勞功能食品的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)論如下：
　?。?）對豬皮明膠的酶解工藝進(jìn)行了研究：以超氧陰離子自由基（O2-?）清除率為主要考察指標(biāo)，

2、水解度（DH）為輔助指標(biāo)，分別測定了底物濃度、酶解溫度、時(shí)間、pH、加酶量對酶解效果的影響，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交優(yōu)化試驗(yàn)，分別確定堿性蛋白酶、PAM蛋白酶、ZHX蛋白酶的最佳酶解條件。
　　結(jié)果表明：堿性蛋白酶的最佳酶解條件組合為底物濃度9％(w/v)，pH為8.0，酶解時(shí)間4h，溫度58℃，酶濃度為6%(w/v)，此時(shí)測得O2-?清除率為44.53%，水解度16.49%；ZHX蛋白酶最佳酶解工藝參數(shù)為底物濃度9%， pH

3、為6.5，時(shí)間4h，酶解溫度40℃，加酶量為4%，此時(shí)測得水解度9.18%， O2-?清除率為59.02%；PAM蛋白酶最佳酶解工藝參數(shù)為底物濃度為7%，pH為6.0，時(shí)間4h，溫度65℃，酶的添加量4%時(shí)，酶解液的水解度和對O2-?清除率分別為9.74%和58.17%。
　　對三種酶在最佳酶解工藝條件下的指標(biāo)進(jìn)行綜合比較，結(jié)果顯示：ZHX蛋白酶酶解產(chǎn)物對O2-?清除率能力最強(qiáng)，其次是PAM蛋白酶，差異不顯著（p>0.05），堿性

4、蛋白酶酶解產(chǎn)物對O2-?清除率相對最低，差異顯著（p<0.05）。
　?。?）試驗(yàn)對PAM蛋白酶和ZHX蛋白酶酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾，分別得到大于300kDa、100kDa-300kDa、10kDa-100 kDa、5kDa-10kDa和小于5kDa的5種分子量范圍的肽段組分，并對各分子量范圍肽段的體外O2-?清除能力進(jìn)行測定，結(jié)果表明，在濃度為10mg/mL時(shí)，分子量小于5kDa的肽段對O2-?清除率分別為38.89%和40.21%，

5、顯著高于酶解原液和其他分子量范圍肽段（p<0.05）。
　　分別測定12mg/mL、24mg/mL、36mg/mL、48mg/mL、60mg/mL濃度下四種酶解產(chǎn)物對1,1-二苯基-2-苦肼基（DPPH?）、?OH和O2-?三種自由基的清除能力，結(jié)果顯示：在同一濃度下，ZHX蛋白酶、PAM蛋白酶酶解產(chǎn)物對 DPPH?清除能力顯著高于分子量小于5kDa的肽段組分（p<0.01），濃度為60 mg/mL時(shí)，PAM蛋白酶酶解混合物對DP

6、PH?的清除率高達(dá)94.38%，比 ZHX蛋白酶酶解產(chǎn)物提高了約13.21%，差異顯著（p<0.05）；當(dāng)濃度為48mg/mL時(shí)，四種酶解產(chǎn)物對?OH清除能力均在94%以上，且分子量小于5kDa的 PAM蛋白酶酶解產(chǎn)物對?OH清除能力顯著高于其酶解混合物（p<0.05）；在同一濃度下，PAM蛋白酶酶解產(chǎn)物對O2-?清除能力著高于ZHX蛋白酶酶解產(chǎn)物（p<0.05）?？傮w而言，四種不同的豬皮明膠酶解產(chǎn)物均表現(xiàn)出一定的體外抗氧化效果。

7、>　　（3）結(jié)合動物模型，對上述四種酶解產(chǎn)物的抗疲勞功效作驗(yàn)證：將篩選出來的具有較強(qiáng)體外抗氧化能力的豬皮明膠酶解產(chǎn)物經(jīng)過分離純化、水浴濃縮、低溫冷凍、真空凍干等步驟制備成粉末。末次給藥后，分別測得小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素氮（BUN）、全血乳酸（LD）、肌乳酸、肝糖原、肌糖原等理化指標(biāo)。結(jié)果表明：四種酶解產(chǎn)物均能顯著延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，其中分子量小于5kDa的PAM蛋白酶酶解物組游泳時(shí)間長達(dá)3668.5±308.12（s），與空白組相