海參肽的酶法制備及其抗氧化、抗疲勞活性研究.pdf

1、海參自古以來就是營養(yǎng)保健食品，從中提取制備的海參肽被證實(shí)具有許多特殊的生理活性，且其生理活性與海參肽分子量分布有關(guān)。本文以海參干制品為原料，研究生物酶解法制備海參肽的工藝，采用超濾技術(shù)分級分離海參肽制備海參寡肽與海參多肽，通過體外抗氧化實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)抗疲勞動物實(shí)驗(yàn)對比兩者的生物活性差異，為海參肽功能食品的開發(fā)提供依據(jù)。
　　本研究比較了6種蛋白酶水解海參蛋白的效果，最終選擇中性蛋白酶，并從反應(yīng)體系的pH、溫度、底物濃度、酶加量和反應(yīng)時(shí)

2、間等因素著手，以多肽得率和分子量分布為考察指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化中性蛋白酶水解海參蛋白制備海參肽的最佳條件。結(jié)果表明，海參蛋白的最佳酶解條件是：溫度為52.0℃，酶加量為6950 U/g，底物濃度為1.0％，水解時(shí)間為3.0 h。在此條件下，多肽得率為35.11%，分子量分布在130-2000 Da的寡肽所占百分比為27.62±1.07%，分子量分布在2000-5000 Da的多肽所占百分比為63.69±1.20%。

3、>　　采用超濾技術(shù)對海參肽進(jìn)行分級分離，獲得海參寡肽組分與海參多肽組分。其中，海參寡肽組分分子量在130-2000 Da占72.6%，分子量在2000-5000 Da占26.8%。海參多肽組分有28.1%肽段分布在130-2000 Da，71.3%肽段分布在2000-5000 Da。
　　采用5種體外化學(xué)模型綜合考察海參寡肽與海參多肽的抗氧化活性，經(jīng)測定，海參寡肽清除DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基、超氧陰離子的IC50分

4、別為7.38 mg/mL、4.25 mg/mL、1.15 mg/mL、12.37 mg/mL以及抑制脂質(zhì)過氧化的IC50為3.68 mg/mL。海參多肽清除DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基、超氧陰離子的IC50分別為8.39 mg/mL、6.19 mg/mL、2.95 mg/mL、15.07 mg/mL以及抑制脂質(zhì)過氧化的IC50為6.26 mg/mL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海參肽具有顯著的抗氧化活性，且海參寡肽優(yōu)于海參多肽。
　　

5、利用海參寡肽與海參多肽喂養(yǎng)小鼠，設(shè)定低、中、高劑量組與空白對照組，灌胃4周后，檢測各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、肝糖原含量、血尿素氮含量以及血乳酸水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是，海參寡肽低、中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間分別為34.42±13.33 min、41.75±17.31 min、50.17±17.60 min，與空白組（14.5±8.46 min）相比均有極顯著性差異（P<0.01）。海參多肽低、中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間分別為44.45±22.1

6、9 min、46.17±24.52 min、48.27±23.23 min，與空白組（17.64±5.05 min）相比均呈現(xiàn)極顯著性差異（P<0.01）。在提升肝糖原貯存能力與降低血清尿素水平等方面，海參寡肽均優(yōu)于海參多肽。對小鼠血清中的丙二醛（MDA）含量以及過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等酶活性進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明海參寡肽與海參多肽均可以有效地降低MDA含量，提升CAT、SOD及