番茄紅素高產(chǎn)菌株的選育.pdf

1、番茄紅素是類胡蘿卜素的一種,具有抗氧化性和多種生理活性,是一種新型功能性天然色素,在食品、藥品及醫(yī)療保健等方面有良好的應(yīng)用前景。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)所得番茄紅素與番茄中番茄紅素相比,其產(chǎn)品質(zhì)量和生理活性完全相同,且發(fā)酵法成本低,污染相小。因此,篩選高產(chǎn)菌株、優(yōu)化發(fā)酵條件,是實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)較理想的途徑。
　　 本文主要研究了番茄紅素的檢測方法,番茄紅素高產(chǎn)菌株的誘變篩選方法,進(jìn)行了發(fā)酵工藝的優(yōu)化。檢測方法研究了HPLC法和722分光光

2、度計發(fā)(比色法),確定HPLC檢測番茄紅素的試驗條件為:色譜柱為伊力特ODS2 C18反相柱3.5X250mm,system gold168檢測器,檢測波長472nm,流動相為甲醇:乙腈:二氯甲烷的混合溶液(4.5:4.5:1,v/v/v),流速1m/min,濃度與峰面積的線性方程為y=0.0001x+0.0453,線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9996,在10mg/L～50mg/L范圍內(nèi),重復(fù)率回收率都符合要求；722分光光度計法(比色法):

3、將破壁提取處理好的樣品放在472nm波長下,在質(zhì)量濃度為0～40mg/L時,質(zhì)量濃度和吸光值的線性關(guān)系為y=0.0262x+0.0895,相關(guān)系數(shù)R2=0.9961,重復(fù)性和回收率都符合要求。
　　 以菌株Y01-9為出發(fā)菌株,經(jīng)過30瓦紫外燈40秒輻射,然后經(jīng)過二苯胺初篩,比色法復(fù)篩,HPLC終篩,篩選到紫外誘變的高產(chǎn)菌株201b7,發(fā)酵效價為35.3mg/L,比原始菌株提高171.5％,然后以菌株201b7為出發(fā)菌株,進(jìn)行D

4、ES誘變,篩選得到了高產(chǎn)菌株D21,發(fā)酵效價為47.1mg/L,比原始菌株提高262.6％,比出發(fā)菌株201b7提高33.5％。
　　 為了快速有效的篩選高產(chǎn)菌株,本文研究了二苯胺篩選法,二苯氨的濃度越高的篩選平板篩選出來的菌株發(fā)酵效價越高,當(dāng)二苯胺的濃度為40μmol/L時,篩選出的高產(chǎn)菌株發(fā)酵效價都在25.8mg/L以上。
　　 還研究了高產(chǎn)菌株D21的發(fā)酵工藝,經(jīng)過單因素試驗和正交試驗確定了菌株D21的最佳發(fā)酵培養(yǎng)