帶魚蛋白多肽亞鐵螯合物的制備及生物活性研究.pdf

1、本研究以帶魚魚糜為原料，利用蛋白酶水解和FeCl2修飾制備出帶魚多肽亞鐵螯合物(Fe-FPH)，研究其螯合工藝和理化性質(zhì)，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)螯合物的抗貧血活性和抗疲勞活性進(jìn)行初步研究，主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.以帶魚魚糜為原料，通過Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，研究帶魚蛋白多肽和亞鐵離子的螯合工藝條件。結(jié)果顯示，螯合反應(yīng)的最佳工藝參數(shù)為pH6.9，溫度29℃，螯合時(shí)間30min，F(xiàn)eCl2溶液與酶解液體積比為1

2、∶50，抗壞血酸添加量為酶解液質(zhì)量的0.1％，該條件下得到的螯合率為80.46％。紅外圖譜研究表明，螯合前后結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，證明帶魚蛋白多肽和亞鐵離子確實(shí)形成新的螯合物。
　　2.以帶魚魚糜為原料，酶解后以酶解液體積為不變量，分別加入不同體積的FeCl2溶液進(jìn)行螯合，制備出不同比例(1％、2％、3％、4％)帶魚蛋白亞鐵螯合物(Fe-HPH)，測(cè)定螯合物的螯合率、溶解度、吸濕性、熱變性溫度等。結(jié)果顯示:2％Fe-HPH螯合率最高;1％

3、、2％、3％、4％螯合物分別在pH為4、5、6、7時(shí)達(dá)到最大溶解度;在相對(duì)濕度為43％和81％的環(huán)境中，吸濕性均為4％Fe-HPH＞3％Fe-HPH＞2％Fe-HPH＞1％Fe-HPH;4種Fe-HPH熱變性溫度分別為51.3℃、62.4℃、68℃、73.5℃，即隨著Fe2+加入量的增多而升高;紫外全波段掃描和紅外光譜驗(yàn)證了螯合前后結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。說明螯合時(shí)加入Fe2+量不同，得到的螯合物性質(zhì)也各有差異。
　　3.以Wistar品系

4、初斷乳大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究Fe-FPH對(duì)大鼠貧血的改善作用。結(jié)果顯示，F(xiàn)e-FPH對(duì)貧血大鼠體重升高的效果最顯著，優(yōu)于硫酸亞鐵和含鐵飼料;對(duì)血常規(guī)中的紅細(xì)胞(rbc)、紅細(xì)胞平均體積(mcv)、血紅蛋白(HGB)、平均細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且和硫酸亞鐵效果相近;對(duì)血清中鐵蛋白(FE)升高效果顯著，且優(yōu)于硫酸亞鐵;對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)和血清鐵均表現(xiàn)出顯著效果，與硫酸亞鐵效果相近;對(duì)腸道菌幾乎無影響。
　　4.

5、以Wistar品系初斷乳大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究Fe-FPH對(duì)大鼠的抗疲勞功效。用木瓜蛋白酶對(duì)帶魚魚糜進(jìn)行水解，得到的水解產(chǎn)物(HPH)用超濾膜分離得到三種具有不同相對(duì)分子質(zhì)量范圍的帶魚蛋白肽，再分別與亞鐵螯合，測(cè)定這三種帶魚肽亞鐵螯合物(Fe-HPH)的抗氧化活性、氨基酸組成及螯合率。根據(jù)這三個(gè)指標(biāo)選擇一種最佳Fe-HPH做抗疲勞動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分為七組，A為陰性對(duì)照組，灌胃蒸餾水，B為谷胱甘肽陽性對(duì)照組，C、D、E分別為低中高Fe-

6、HPH劑量組，F(xiàn)為HPH組，G為FeCl2組。大鼠每天灌胃lh后進(jìn)行強(qiáng)制游泳訓(xùn)練，連續(xù)灌胃20d。在20d時(shí)分別測(cè)定七組大鼠的血紅蛋白飽和率、力竭游泳時(shí)間、SOD活性、MDA含量、肝臟GSH-Px活力和血乳酸指數(shù)。結(jié)果顯示:Fe-HPH能提高血紅蛋白飽和率;明顯延長大鼠力竭游泳時(shí)間;顯著提高全血、肌肉中的SOD活力，肝臟中SOD活力雖提高不顯著，但具有升高趨勢(shì)；對(duì)于全血、肝臟、肌肉中的MDA含量均有顯著下降的趨勢(shì)，且接近或優(yōu)于陽性對(duì)照組