奶牛舍空氣微生物快速計數培養(yǎng)基的設計與優(yōu)化.pdf

1、中國在乳制品生產食用方面位于世界前列，但近些年來，乳制品安全問題發(fā)生日益頻繁，其中，微生物污染是原料奶生產過程中重要的污染源，不僅對乳制品質量和奶牛本身健康造成影響，更對我國消費者人身健康存在重大威脅，因而原料奶生產過程中的質量和安全日益受到企業(yè)和研究人員的關注。為保障原料奶衛(wèi)生健康安全，提高微生物計數檢測速率，縮短微生物計數時間。本課題針對哈爾濱周邊奶牛場配合微生物空氣采樣器進行四季空氣采樣，并采用基質輔助激光解析飛行時間質譜法進行鑒

2、定，鑒定結果得出四季檢出率最高的致病菌分別屬于芽孢桿菌屬（Bacillus）:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus);腸球菌屬(Enterococcus):糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌(Enterococcusfaecium);葡萄球菌屬（Staphylococcus）:木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）、產色葡萄球菌

3、(Staphylococcus chromogenes);不動桿菌屬（Acinetobacter）:洛菲不動桿菌(Acinetobacter lwoffii)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii);棒狀桿菌屬（Corynebacterium）:結膜干燥棒狀桿菌（Corynebacterium xerosis）。所得結果與國內外研究報道基本相一致。
　　本研究以這9種代表性致病菌為研究對象，參考國內外計數培

4、養(yǎng)基營養(yǎng)成分在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基基礎上添加酵母浸出粉及葡萄糖，并用胰蛋白胨替代蛋白胨，制成基底培養(yǎng)基。優(yōu)化后基底培養(yǎng)基配比為:胰蛋白胨10g/L，葡萄糖13 g/L，酵母浸出粉10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L。
　　在基底培養(yǎng)基基礎上用涂布計數法篩選出促代表菌共同生長的營養(yǎng)物質:甘露醇、丙酮酸鈉、硫酸鎂、生物素及西紅柿汁。單因素法確定各促生長物質的適宜濃度范圍，再采用響應面設計方法對比促生長物質之間關系，優(yōu)化各促生長物

5、質濃度，最終確定培養(yǎng)基配比制成快速計數培養(yǎng)基，從而縮短空間微生物的計數時間并提高計數效率。快速計數培養(yǎng)基添加促生長物質結果為:甘露醇、硫酸鎂、丙酮酸鈉、生物素及西紅柿汁。以此培養(yǎng)基對代表菌采用涂布計數方法，恒溫培養(yǎng)10h可計數，菌落計數可達1.28×109CFU/mL。應用其與空氣采樣器配合使用，奶牛場實際采回樣品培養(yǎng)24h即可計數，與常規(guī)48h計數比較無差異，且為NA培養(yǎng)基計數時間的一半。達到了快速計數的目的，填補國內外空間微生物快速