耐鹽酵母基因組學(xué)的研究.pdf

1、T酵母(Candida versatilis)和S酵母（Zygosaccharomyces rouxii）是醬油釀造過(guò)程中重要的耐鹽產(chǎn)香微生物，是典型的酯香型和醇香型酵母。S酵母在2009年完成了全基因組的測(cè)序而同樣重要的T酵母的全基因組測(cè)序一直都未進(jìn)行，而且圍繞T酵母的研究基本上屬于空白。因此本論文通過(guò)對(duì)T酵母全基因組序列的研究來(lái)對(duì)T酵母的基本生物功能進(jìn)行一個(gè)初步的解讀，為后續(xù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)以及代謝組學(xué)的研究提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)

2、，同時(shí)也為醬油發(fā)酵行業(yè)的生產(chǎn)和管理提供科學(xué)依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)將羅氏/454 FLX+和Illumina2000高通量測(cè)序平臺(tái)數(shù)據(jù)初步拼接得到52個(gè)框架序列（Scaffold），通過(guò)修正后的基因組大小為9.7 Mbp，通過(guò)AUGUSTUS軟件預(yù)測(cè)以及與GO數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)最終注釋為4711個(gè)基因。T酵母和S酵母全基因組序列進(jìn)行比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)二者的基因組盡管相似度達(dá)到80％左右，但是與S酵母相比T酵母仍然存在部分序列的缺失和倒轉(zhuǎn)。對(duì)T酵

3、母和S酵母的全基因組蛋白進(jìn)行聚類分析發(fā)現(xiàn)，二者共有4239個(gè)直系同源蛋白，T酵母還含有235個(gè)特異基因，這些特異性基因主要參與酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)，脂肪酸和特殊氨基酸的代謝以及電子的傳遞等方面。對(duì)KAAS預(yù)測(cè)到的四條代謝途徑進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，T酵母體內(nèi)存在著完整的減數(shù)分裂途徑，同時(shí)它還具有很強(qiáng)的氨基酸合成能力，能夠合成20種氨基酸中的19種。對(duì)碳代謝途徑分析后發(fā)現(xiàn)T酵母具有完整的糖酵解，三羧酸循環(huán)以及磷酸戊糖途徑。此外T酵母體內(nèi)還存
　　

4、在兩條絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路，主要參與對(duì)高滲環(huán)境和細(xì)胞完整度的調(diào)節(jié)。對(duì)不同鹽度不同時(shí)間條件下T酵母的胞內(nèi)外甘油和海藻糖的含量變化分析發(fā)現(xiàn)，甘油和海藻糖相輔相成共同提高了酵母的耐高滲能力。T酵母在高滲環(huán)境中，甘油和海藻糖能夠迅速地在細(xì)胞內(nèi)累積，但是積累到一定程度之后，酵母又會(huì)慢慢將胞內(nèi)的甘油外排來(lái)保持胞內(nèi)外滲透壓的平衡，這也通過(guò)后期胞內(nèi)外甘油含量的變化情況得到驗(yàn)證。利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法考察了HOG1、GPD1、TPS1和TPS2不