常見出生缺陷的基因組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　將孕婦血漿胎兒 DNA檢測技術(shù),與現(xiàn)有產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷方法相結(jié)合,分析孕婦血漿胎兒游離DNA檢測在診斷胎兒染色體異常中的應(yīng)用價值;探索唐氏綜合征等常見染色體異常疾病的產(chǎn)前診斷新策略。
　　材料與方法:
　　1、常見染色體疾病產(chǎn)前篩查新策略的臨床研究
　　以2011年3月10日—2012年7月30日在解放軍總醫(yī)院接受孕婦外周血中胎兒游離DNA檢測者4289例為研究對象,均為單胎,平均年齡31.9歲,孕

2、周(19.6±7.8)周,按照孕婦年齡及血清學(xué)篩查結(jié)果分為3組:(1)唐氏綜合征篩查(唐篩)高危組:2316例,預(yù)產(chǎn)年齡<35歲,行唐氏綜合征(唐氏)血清學(xué)篩查提示21三體高風(fēng)險;(2)高齡組:1787例,預(yù)產(chǎn)年齡≥35歲;(3)其他原因組:186例,預(yù)產(chǎn)年齡<35歲,未行唐篩,或唐篩結(jié)果為低風(fēng)險。唐篩高危組及高齡組共計4103例,孕婦均因擔(dān)心穿刺手術(shù)的流產(chǎn)風(fēng)險或產(chǎn)前檢查醫(yī)院無產(chǎn)前診斷條件等原因,未行介入性診斷。由深圳華大基因研究院臨床

3、檢驗中心采用Illumina HiSeq2000測序平臺,對孕婦外周血中胎兒游離 DNA進行序列分析,對檢測結(jié)果陽性者進行介入穿刺及胎兒染色體核型分析;對檢測結(jié)果陰性者行電話隨訪其胎兒出生后情況。
　　2、基因組學(xué)新技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用分析
　　以2009年8月1日至2012年7月30日在解放軍總醫(yī)院就診,并行遺傳咨詢、介入性產(chǎn)前診斷的孕婦共計1091例。按是否引入孕婦外周血中胎兒游離DNA檢測作為篩查指標,分為三組(

4、1)傳統(tǒng)組:731例,于2009年8月1日至2011年7月30日,經(jīng)年齡、超聲或血清學(xué)篩查結(jié)果判定為遺傳高風(fēng)險,且在我院進行羊膜腔穿刺的孕婦,本組按時間前后又分成兩組。(2)選擇組:369例,于2011年8月1日至2012年7月30日,經(jīng)年齡、超聲、血清學(xué)篩查或胎兒游離 DNA檢測判定為遺傳高風(fēng)險,且在我院進行羊膜腔穿刺的孕婦。按時間縱向比較上述高危孕婦的組成、染色體核型的結(jié)果,進而分析在引入胎兒游離DNA檢測的前后,對介入性產(chǎn)前診斷的

5、影響。
　　同時篩選出超聲檢查胎兒存在心臟結(jié)構(gòu)異常,并進行介入性產(chǎn)前診斷的孕婦為研究對象。收集上述孕婦的臨床信息,經(jīng)知情同意后獲取帶有胎兒遺傳物質(zhì)的樣本(羊水、臍血),并采集夫婦雙方的外周血。對樣本進行染色體核型分析、微陣列-比較基因組雜交檢測,以初步探討新的檢測技術(shù)在先心病診斷中的應(yīng)用價值。
　　結(jié)果:
　　1、3組孕婦共計4289例均成功完成胎兒游離DNA檢測,檢測結(jié)果為陽性者共63例,包括21三體34例,18三體

6、5例,以及13三體2例,45XO14例,47XXY8例。其中唐篩高危組檢出21三體19例,18三體2例;高齡組檢出21三體10例,18三體2例;其他原因組檢出21三體5例,18三體1例。胎兒游離DNA檢測結(jié)果陽性的39例孕婦中,32例(82.05％)進行了羊膜腔穿刺及染色體核型分析。34例21三體檢測陽性中有28例(82.35%)進行了羊膜腔穿刺,其中27染色體核型均為47,XN,+21,1例核型未見異常,診斷符合率96.43%;6例未

7、行核型分析:1例是在孕20周前超聲檢查已提示胎兒存在明顯結(jié)構(gòu)異常(室間隔缺損、右位心、脈絡(luò)叢囊腫),1例在檢測結(jié)果回報前已發(fā)生胎死宮內(nèi),另外4例為外地孕婦,均已分娩健康后代,此次拒絕行核型分析,在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院直接引產(chǎn)。5例18三體檢測陽性中有4例進行了羊膜腔穿刺,其中3例核型為47,XN,+18;另1例出生后驗證核型為46,XN/47,XN,+18,18三體細胞占總細胞的2%,胎兒未行引產(chǎn),隨訪胎兒出生后發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)異常;另1例因在穿刺手術(shù)前已

8、發(fā)生胎死宮內(nèi),未能進行核型驗證,產(chǎn)前超聲提示胎兒大小較妊娠時間小3周,且全身水腫。3組孕婦血漿中胎兒游離DNA檢測結(jié)果陰性者4226例,經(jīng)電話隨訪,全部新生兒中經(jīng)檢查均未發(fā)現(xiàn)唐氏患兒。
　　(2)累計對1091例孕婦進行了羊膜腔穿刺,穿刺成功率為100%,羊水細胞培養(yǎng)成功率99.45%(失敗6例)。選擇進行羊膜腔穿刺的孕婦主要以高齡、“唐篩”21三體高風(fēng)險和超聲異常為主,其中高齡孕婦所占的比例由2009年的25.30%升高至201

9、1年的46.39%,“唐篩”21三體高風(fēng)險孕婦所占比例則由2009年的53.01%下降至2011年的16.67%,而超聲異常者在2011年所占比例較前兩年稍有升高。共檢出異常核型69例,包括數(shù)目異常46例,結(jié)構(gòu)異常23例。染色體異常整體檢出率達6.32%,尤其是2011.8至2012.7間異常核型檢出率明顯增高,達到了10.00%,明顯高于本地區(qū)平均值。425例高齡孕婦樣本中,檢出異常核型6例,檢測陽性率為1.41%,僅為全部異常的9%

10、;“無創(chuàng)”檢測陽性34例孕婦中,檢出異常核型25例,檢測陽性率為73.53%,占全部異常核型的19%。同時對4例樣本進行了微陣列-比較基因組雜交檢測,檢測結(jié)果均為陰性,未發(fā)現(xiàn)致病性異常,分析主要原因在于檢查樣本量不足,需擴大樣本量以進一步研究。
　　結(jié)論:
　　(1)胎兒游離DNA檢測是一種安全、準確、高通量的21三體產(chǎn)前檢測方法,與染色體核型分析結(jié)果相符;可作為唐氏患兒血清血篩查高風(fēng)險孕婦的進一步篩選方法,也可大幅度降低不