苯并三嗪衍生物SR-H22質(zhì)量控制研究.pdf

1、藥品質(zhì)量控制研究對(duì)于新藥研發(fā)極為重要。質(zhì)量控制不僅需針對(duì)原料藥及制劑，還需對(duì)輔料、內(nèi)外包裝材料、生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)攘魍ōh(huán)節(jié)；對(duì)于藥品的安全可控起著決定性的意義。
　　苯并三嗪-1,4-二氧化物衍生物SR-H22為本課題組研制合成的生物還原劑衍生物，本研究對(duì)抗腫瘤活性化合物SR-H22的質(zhì)量控制進(jìn)行了研究。
　　一 SR-H22的制備及其各中間體熔點(diǎn)、紫外及液相保留時(shí)間的測(cè)定
　　參照本課題組已有路線制備SR-H22，并

2、對(duì)各中間體的熔點(diǎn)、紫外、含量進(jìn)行測(cè)定。
　　二 SR-H22質(zhì)量控制研究
　?。ㄒ唬㏒R-H22含量測(cè)定方法的建立
　　建立了化合物SR-H22含量測(cè)定的高效液相色譜法，其色譜條件為：色譜柱：Diamond C18 Column(250mm×4.6mm,5um)；流動(dòng)相：乙腈-水（25:75,V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm；流速：1.0ml·min-1；進(jìn)樣濃度：25ug·ml-1；進(jìn)樣體積：20ul；柱溫：35℃。液

3、相方法建立后，對(duì)其靈敏度、精密度、重現(xiàn)性、線性范圍等進(jìn)行了考察，表明該液相方法穩(wěn)定可靠，可用于SR-H22的含量測(cè)定。
　　在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按SR-H22峰計(jì)算不低于7000，分離度不小于1.5。經(jīng)過方法學(xué)考察，本品在5ug·ml-1-100ug·ml-1(r=0.9979)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程：Y=1.8105×105X-3.2081×105，檢測(cè)限和定量限分別為1ng及3ng，日內(nèi)精密度、日間精

4、密度RSD考察均小于2％。
　?。ǘ㏒R-H22有關(guān)物質(zhì)檢查方法的建立
　　建立了SR-H22的有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，其色譜條件為：色譜柱：Diamond C18(250mm×4.6mm,5um)；流動(dòng)相：乙腈-水（25:75,V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)243nm；流速：1.0ml·min-1；進(jìn)樣濃度：100ug·ml-1；進(jìn)樣體積20ul；柱溫：35℃。
　　考察了酸、堿、氧化、高溫、強(qiáng)光對(duì)SR-H22原料藥的影響。試驗(yàn)結(jié)

5、果表明：SR-H22在1mol·L-1HCl、30%H2O2、強(qiáng)光照射、105℃烘箱中放置12h，均未發(fā)現(xiàn)明顯降解產(chǎn)物；表明SR-H22在強(qiáng)酸、氧化、強(qiáng)光及高溫條件下是穩(wěn)定的。但在1mol·L-1NaOH堿性環(huán)境中，常溫放置1h及可發(fā)現(xiàn)明顯降解產(chǎn)物產(chǎn)生，主峰純度下降為80%；若進(jìn)一步加熱，則會(huì)發(fā)現(xiàn)主峰完全消失，轉(zhuǎn)變?yōu)榻到猱a(chǎn)物。用上述色譜方法能夠使主峰及降解產(chǎn)物完全分離。
　　應(yīng)用HPLC-MS/MS對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，具體內(nèi)容如下

6、：色譜條件同前，檢測(cè)m/z為163有關(guān)物質(zhì)2樣品溶液，采用SIM模式分析分析，當(dāng)Fragmentor為110V時(shí)，m/z為163的正離子峰響應(yīng)最佳。同理，對(duì)m/z為147有關(guān)物質(zhì)1采取相同的實(shí)驗(yàn)方式考察，發(fā)現(xiàn)當(dāng)Fragmentor為90V時(shí)，m/z為147的正離子峰響應(yīng)最佳。
　　考察碰撞能量：當(dāng)檢測(cè)離子m/z為163時(shí)，F(xiàn)ragmentor為110V，Collision Energy設(shè)置為14V、22V、30V、42V；在不同碰

7、撞能量下，m/z為39、44、65、80、91、133、163的碎片峰均有出現(xiàn)，推測(cè)子離子結(jié)構(gòu)。當(dāng)檢測(cè)離子m/z為147時(shí)，F(xiàn)ragmentor為90V，Collision Energy設(shè)置為18V、22V、26V、46V；在不同碰撞能量下，m/z為39、65、91、147的碎片峰均有出現(xiàn)，推測(cè)子離子結(jié)構(gòu)。并確定有關(guān)物質(zhì)2為合成中間體SR-H02。
　　（三）SR-H22殘留溶劑的測(cè)定
　　為了確保藥品的安全，需對(duì)殘留溶劑進(jìn)

8、行測(cè)定。用氣相色譜法建立了SR-H22中4種殘留溶劑的測(cè)定方法，具體方法如下：色譜柱：DB-WAX(30m×0.45mm，0.85um)毛細(xì)管色譜柱；載氣：高純氮?dú)?；檢測(cè)器：FID檢測(cè)器。采用程序升溫，柱溫：起始溫度35℃至200℃，保持6min，柱頭壓：4psi。進(jìn)樣口溫度：220℃，檢測(cè)器溫度：250℃。頂空瓶溫度：75℃；定量環(huán)：90℃；傳送帶：100℃。分流進(jìn)樣，DMSO為溶劑，測(cè)定殘留溶劑的含量。方法建立后：對(duì)其靈敏度、精密度

9、、重現(xiàn)性及線性范圍等進(jìn)行考察，表明本法可用于SR-H22的殘留溶劑的測(cè)定。保持7min35℃/min速率
　?。ㄋ模┓€(wěn)定性試驗(yàn)
　　影響因素試驗(yàn)
　　SR-H22樣品在高溫(60℃)、高濕(92%+5%)和強(qiáng)光照射(4500lx+500lx)條件下開口放置10天，于第5、10天取樣檢驗(yàn)，了解SR-H22降解產(chǎn)物。試驗(yàn)結(jié)果表明SR-H22原料藥在高溫、高濕和強(qiáng)光照射試驗(yàn)條件下放置10天穩(wěn)定；外觀、性狀、含量及有關(guān)物質(zhì)均未

10、見明顯變化。
　?。ㄎ澹?duì)起始原料SR-H01、合成中間體SR-H02建立了高效液相色譜分析方法SR-H01的液相分析方法為：色譜柱 Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5um)流動(dòng)相：乙腈-水（45:55,V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)225nm，流速：1.0ml·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣體積：20ul。在該液相方法上進(jìn)行了方法學(xué)考察，SR-H01的檢測(cè)限（LOD）為2ng，定量限（LQD）為6ng；在10u

11、g·ml-1-150ug·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法精密度、日內(nèi)日間精密度均小于2%。
　　SR-H02液相分析方法同 SR-H22：色譜柱Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5um)流動(dòng)相：乙腈-水（25:75,V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)238nm，流速：1.0ml·min-1，柱溫35℃，進(jìn)樣體積：20ul。在該液相方法上進(jìn)行了方法學(xué)考察，SR-H02的檢測(cè)限（LOD）為1ng，定量限（LQD）為3n

12、g；在5ug·ml-1-100ug·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法精密度、日內(nèi)日間精密度均小于2%。
　?。├砘再|(zhì)及檢查
　　采用薄層色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法對(duì)樣品及對(duì)照品進(jìn)行了鑒別測(cè)定。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版第四部通則要求，對(duì)三批樣品(批號(hào)：20151106、20151109、20151113)進(jìn)行了理化性質(zhì)(性狀、溶解度、pH、熔點(diǎn)等)、無機(jī)檢查。本品為黃色粉末，無嗅。在甲醇、乙腈、乙醇、N,N

13、-二甲基甲酰胺中微溶，在水、0.1mol·L-1鹽酸，0.1mol·L-1氫氧化鈉中極微溶解，熔點(diǎn)為212.3℃-213.5℃，無引濕性。無機(jī)檢查結(jié)果顯示：氯化物＜0.01%、硫酸鹽＜0.04%、干燥失重<20ppm、砷鹽<2ppm、熾灼殘?jiān)?0.2%。
　　（七）小結(jié)
　　參照《中國(guó)藥典》2015版、《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》的內(nèi)容，建立SR-H22的原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究辦法；驗(yàn)證其專屬性，并對(duì)其堿破壞