轉(zhuǎn)錄因子重組蛋白質(zhì)的純化及活性檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、轉(zhuǎn)錄因子Oct4和Sox2是維持細胞自我更新與分化能力的主要調(diào)控因子,也是使體細胞發(fā)生重編程為多功能誘導干細胞(iPSCs)的關鍵因素。目前利用轉(zhuǎn)錄因子重組蛋白質(zhì)Oct4和Sox2已經(jīng)成為一種取代DNA轉(zhuǎn)染,安全誘導iPSCs的最新途徑。但是由于重組蛋白質(zhì)溶解度和純度較低,降低了誘導效率和iPSCs的質(zhì)量,所以需要在重組蛋白質(zhì)表達,純化方面提出改進方法,以確保重組蛋白質(zhì)Oct4和Sox2能夠高效地進入細胞并充分發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用。

2、>　　通過對鼠源轉(zhuǎn)錄因子Oct4和Sox2的密碼子進行改良優(yōu)化,利用大腸桿菌BL21(DE3)和pET質(zhì)粒表達系統(tǒng)誘導表達重組蛋白質(zhì)。利用多步純化方法和蛋白質(zhì)陽離子試劑SPDP/PEI600分別提高轉(zhuǎn)錄因子重組蛋白質(zhì)的純度和濃度。用熒光標識重組蛋白質(zhì),并借助WesternBlot方法明確其在細胞內(nèi)的運動情況及穩(wěn)定程度。利用熒光素酶報告基因和靶基因Nanog的調(diào)控序列構(gòu)建載體,結(jié)合穩(wěn)定細胞株評估轉(zhuǎn)錄活性功能。實驗結(jié)果表明,通過以上方法可以

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