血虛便秘模型大鼠結(jié)腸AQPs的差異化表達(dá)研究.pdf

1、目的：建立一種符合中醫(yī)血虛便秘證候的動(dòng)物模型，并對(duì)模型動(dòng)物結(jié)腸黏膜水通道蛋白（AQPs）的表達(dá)與血虛便秘形成的相關(guān)性進(jìn)行探討，為血虛便秘的相關(guān)研究提供參考。
　　方法：
　　1.血虛便秘大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)
　　64只SPF級(jí)SD大鼠，隨機(jī)分為正常組、血虛組、便秘組和血虛便秘組，共4組，每組16只。血虛組皮下注射乙酰苯肼（APH）42mg/kg+腹腔注射環(huán)磷酰胺（CPA）28mg/kg，便秘組灌胃復(fù)方地芬諾酯13.5m

2、g/kg，血虛便秘組皮下注射乙酰苯肼42mg/kg+腹腔注射環(huán)磷酰胺28mg/kg+灌胃復(fù)方地芬諾酯13.5mg/kg，連續(xù)28d。造模期間觀察大鼠一般狀態(tài)和體重變化，造模第28d和造模結(jié)束第7d，各組動(dòng)物眼眶靜脈叢采血檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）和紅細(xì)胞壓積（HCT），同時(shí)記錄大鼠首粒黑便排出時(shí)間（TFBF）、糞便含水量（FWC）和結(jié)腸含水量（CWC）；取結(jié)腸組織進(jìn)行HE和AB-PAS染色，顯微鏡

3、下觀察結(jié)腸組織形態(tài)及結(jié)腸黏液分泌情況。
　　2.血虛便秘模型大鼠結(jié)腸AQPs的差異化表達(dá)
　　取血虛便秘模型大鼠結(jié)腸黏膜組織，固定，包埋，切片，免疫組化（IHC）染色，顯微鏡下觀察，用圖像處理軟件對(duì)大鼠結(jié)腸黏膜水通道蛋白（AQPs）的表達(dá)進(jìn)行定位分析，并計(jì)算陽性表達(dá)參數(shù)的平均光密度值（MOD），對(duì)AQPs的表達(dá)進(jìn)行半定量分析。
　　結(jié)果：
　　1.正常組大鼠活動(dòng)正常，反應(yīng)靈敏，皮毛密而有光澤；血虛組大鼠蜷縮，萎靡

4、，皮毛膨松、易掉，耳、鼻、唇、尾蒼白；便秘組大鼠皮毛光澤暗淡，排便減少；血虛便秘組大鼠蜷縮，萎靡，毛枯疏、光澤暗淡，耳、鼻、唇、尾蒼白，排便減少，糞便干結(jié)、黏連。血虛組、便秘組及血虛便秘組隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，均出現(xiàn)體重增長(zhǎng)緩慢的情況。血虛組大鼠WBC、RBC、HGB和HCT均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），糞便質(zhì)軟，TFBF、FWC和CWC均無明顯變化。結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，血虛組大鼠結(jié)腸組織形態(tài)及黏液分泌未見明顯異常改變。便秘組

5、大鼠糞便質(zhì)硬，TFBF顯著延長(zhǎng)（P＜0.01）、FWC顯著下降（P＜0.01），但WBC、RBC、HGB和HCT無顯著變化。結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，便秘組大鼠結(jié)腸腸管呈結(jié)節(jié)狀，結(jié)腸帶變薄，黏膜層上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞出現(xiàn)不同程度萎縮，黏膜表面黏液覆蓋減少。血虛便秘組大鼠糞便質(zhì)硬，TFBF顯著延長(zhǎng)（P＜0.01）、FWC顯著下降（P＜0.01），WBC、RBC和HCT均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，血虛便秘組

6、大鼠結(jié)腸腸管呈結(jié)節(jié)狀，結(jié)腸帶變薄，黏膜層上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞出現(xiàn)不同程度萎縮，黏膜表面黏液覆蓋減少。
　　2.免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，血虛便秘組大鼠結(jié)腸粘膜AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。其中吸收細(xì)胞表達(dá)的主要是AQP1、AQP3、AQP4；杯狀細(xì)胞表達(dá)的主要是AQP3和AQP9。
　　結(jié)論：
　　1.乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺聯(lián)合復(fù)方地芬諾酯復(fù)合因素造模建立的血