石榴果皮提取物對(duì)食品腐敗菌的抑菌活性及機(jī)理研究.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界每年有20％左右的肉制品損失于各種腐敗變質(zhì)。這不僅導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)上的損失，更危及消費(fèi)者的健康和生命。其中微生物污染是導(dǎo)致食品腐敗變質(zhì)的主要原因之一。本論文以石榴加工中的副產(chǎn)物—石榴果皮為材料，以食品中的常見腐敗菌為供試菌，以抑菌圈直徑和MTT清除率為活性追蹤指標(biāo)，對(duì)石榴果皮中抑菌活性物質(zhì)的抑菌特性、成分分析、提取的工藝條件及抑菌機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，研究結(jié)果為石榴果皮工業(yè)化開發(fā)利用和研制新型食品防腐劑提供了理論和技術(shù)依據(jù)。本論文

2、主要研究結(jié)果如下:
　　(1)對(duì)石榴果皮提取物抑菌活性初步研究結(jié)果表明，石榴果皮乙醇提取物對(duì)九種食品腐敗菌均有抑制作用，其中對(duì)溶酪大球菌、藤黃微球菌和變形桿菌的抑制作用最為顯著。對(duì)各供試菌的抑制效果依次為:溶酪大球菌(Macrococcuscaseolyticus)＞藤黃微球菌(Micrococcus luteus)＞變形桿菌(Proteusbacillusvulgaris)＞腐生葡萄球菌(Staphylococcus sapro

3、phyticus)＞枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis、大腸桿菌(Escherichia coli＞熒光假單胞桿菌(Pseudomonas fluorescens)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)＞白色鏈球菌(Monilia albican)。
　　(2)采用藥物平板稀釋法研究了石榴果皮乙醇提取物對(duì)九種食品腐敗菌的最低抑制濃度(MIC)（以生藥量計(jì)），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:石榴果皮乙醇提取物對(duì)溶酪大球

4、菌和藤黃微球菌的抑制作用最強(qiáng)，其MIC值為12.5mg/mL;對(duì)腐生葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌的MIC值為25.0mg/mL;對(duì)枯草芽孢桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、熒光假單胞桿菌的MIC值為50.0mg/mL;對(duì)白色鏈球菌的MIC值為100.0mg/mL。
　　(3)采用藥物平板稀釋法研究了石榴果皮乙醇提取物各萃取相對(duì)溶酪大球菌和藤黃微球菌的抑菌活性。結(jié)果表明正丁醇萃取物具有顯著的抑菌效果，對(duì)溶酪大球菌和藤黃微球菌的MIC值（以生藥量計(jì)）

5、均為12.5mg/mL，較之未經(jīng)萃取的石榴果皮乙醇提取物對(duì)這兩種菌MIC值沒(méi)有變化，乙酸乙酯萃取物抑菌活性較弱，對(duì)溶酪大球菌的MIC值為50.0mg/mL，對(duì)藤黃微球菌的MIC值為25.0mg/mL，剩余水層物質(zhì)幾乎沒(méi)有抑菌活性。以上實(shí)驗(yàn)表明石榴果皮乙醇提取物主要抑菌活性物質(zhì)集中于正丁醇萃取物中。
　　(4)以溶酪大球菌為指示菌，研究了熱處理和紫外照射處理對(duì)石榴果皮正丁醇萃取物抑菌活性的影響。結(jié)果表明高溫處理和紫外照射對(duì)石榴果皮正

6、丁醇萃取物的抑菌活性幾乎沒(méi)有影響。
　　(5)綜合運(yùn)用現(xiàn)代色譜學(xué)技術(shù)（大孔樹脂柱層析色譜、硅膠柱層析色譜、Sephadex LH-20色譜、高效液相色譜）從石榴果皮正丁醇萃取物中分離得到1種單體化合物。對(duì)化合物的鑒定和分析，得出此化合物為異槲皮苷。
　　(6)以異槲皮苷的含量為指標(biāo)，采用乙醇回流提取法對(duì)石榴果皮中異槲皮苷的提取工藝參數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，通過(guò)正交法得出對(duì)石榴果皮抑菌活性物質(zhì)提取效果影響的大小順序?yàn)?乙醇濃度、提取

7、溫度、提取時(shí)間、料液比;其最佳提取條件為:乙醇濃度90％，提取溫度80℃，提取時(shí)間2.5h，料液比1∶15。在此優(yōu)化條件下，得到的異槲皮苷的含量為2.36％。
　　(7)正常組和加藥組溶酪大球菌生長(zhǎng)曲線對(duì)比結(jié)果表明，石榴果皮正丁醇萃取物能夠抑制溶酪大球菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體分裂;呼吸抑制試驗(yàn)結(jié)果表明，石榴果皮正丁醇萃取物主要是抑制HMP途徑，導(dǎo)致還原力NADPH缺乏，引起代謝功能障礙，從而達(dá)到抑菌的目的;通過(guò)測(cè)定堿性磷酸酶AKP結(jié)果表