Nudix水解酶NudJ在PAPS合成中的應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、肝素是一種多糖類物質(zhì)，是被廣泛使用的抗凝血藥物。3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(PAPS:3'-Phosphoadenosine-5'-phosphosulfate，)是肝素酶法合成過程中酶的輔因子和硫酸基團(tuán)供體。之前，已有研究用大腸桿菌表達(dá)幾種粗酶來合成PAPS，這種粗酶合成體系以三磷酸腺苷(ATP: adenosine thiphosphate)為底物，包括三種粗酶以及第四種未知酶。第四種未知酶的作用是降解PAPS合成過程中的副產(chǎn)物

2、二磷酸腺苷(ADP:adenosine diphosphate)。為了探究體外酶法合成PAPS的方法，我們對(duì)第四種未知酶做了研究并且建立了一種體外酶法合成PAPS的方法。在本研究中，我們明確第四種未知酶是Nudix水解酶NudJ，并且我們將NudJ加入PAPS的合成體系中，ADP被降解為單磷酸腺苷（AMP:adenosine diphosphate）。本文以大腸桿菌BL21為宿主菌，分別表達(dá)三磷酸腺苷硫酸化酶(KAST: adenosi

3、netriphosphate sulfurylase，)、5'-磷酸腺苷激酶、(APSK: adenosine-5'-phosphosulfatekinase，、焦磷酸酶(PPA:pyrophosphatase)和Nudix水解酶NudJ四種酶。我們研究得出10 mMADP可被NudJ在15min內(nèi)完全水解為AMP，并且在ADP和ATP同時(shí)存在時(shí)NudJ優(yōu)先水解ADP。除此之外，NudJ對(duì)PAPS無水解作用。NudJ的加入使PAPS合成

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