PI3K-Akt信號通路參與白藜蘆醇對大鼠缺血再灌注心肌的保護作用.pdf

1、目的：
　　探討白藜蘆醇(Resveratrol，Res)對大鼠缺血再灌注心肌損傷的保護作用及對心肌細胞凋亡的抑制作用與PI3K-Akt信號通路的相關性，從信號通路的角度闡明該藥的心肌保護作用的機制，為臨床應用提供新的理論依據(jù)；通過藥物機制研究為揭示中醫(yī)治療理論內涵提供線索；尋找白藜蘆醇可能的作用靶標，為新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　50只成年健康雄性SD大鼠，體重230-250g，隨機分為5組(n=10)，

2、即假手術組(SH組)、缺血再灌注組(I/R組)、白藜蘆醇處理組(Res組)、白藜蘆醇處理+渥曼青霉素組(Res+Wom組)、缺血再灌注+渥曼青霉素組(I/R+Wom組)。采用結扎冠狀動脈左前降支(leftanterior descending coronary artery，LAD)45 min，再灌注120 min的方法復制大鼠心肌缺血再灌注實驗模型。(1)SH組：開胸，在左冠狀動脈前降支下穿線但不結扎，穿線時及第46分鐘取下穿線時由

3、舌下靜脈分別注入生理鹽水1ml；(2)IR組：結扎左冠狀動脈前降支45分鐘，造成急性心肌缺血模型，再灌注120分鐘，結扎時及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入生理鹽水1ml，余同假手術組；(3)Res組：結扎時及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入白藜蘆醇溶液20mg/Kg(約1ml)，余同假手術組；(4)Res+Wom組：結扎時及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入白藜蘆醇溶液20mg/Kg及渥曼青霉素(約1ml)，余同Res組；(5)IR+Wom組：結扎

4、時及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入1ml生理鹽水及渥曼青霉素，余同IR組。分別于缺血前、缺血30 min以及再灌注60、90、120 min時，測定左心室收縮壓(Left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末期壓(Left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP)、左室內壓力變化最大上升和下降速率(Maximum rates of leftventr

5、icular pressure development and decay，±dp/dtmax)；化學比色法測定心肌一氧化氮(Nitric oxide，NO)和一氧化氮合酶(Nitric-oxide synthase，NOS)的含量；免疫組化測定心肌組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達；TUNEL法檢測心肌細胞凋亡程度；Western blot測定心肌組織總Akt(即T-Akt)及磷酸化Akt(即p-Akt)信號蛋白的表達。
　　結

6、果：
　　1、白藜蘆醇對大鼠心肌缺血再灌注過程中的血流動力學的影響
　　各組大鼠的體重、年齡相近，身體健康，缺血前血流動力學指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與SH組比較，其余各組各時點LVSP和+dp/dtmax呈進行性下降，LVEDP和-dp/dtmaxx呈進行性升高(P<0.05)。與IR組比較，Res組各時間點LVSP、+dp/dtmax升高，LVEDP、-dp/dtmax降低(P<0.05)，Res+Wom組和

7、IR+Wom組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組各時間點的LVSP、+dp/dtmax明顯降低(P<0.05)，LVEDP、-dp/dtmax明顯升高(P<0.05)。
　　2、白藜蘆醇對心肌組織中NO和NOS表達的影響
　　與IR組比較，Res組NO和NOS的含量明顯增加(P<0.05)；Res+Wom組和IR+Wom組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與Res組比較，Res

8、+Wom組和IR+Wom組NO和NOS的含量明顯降低(P<0.05)。
　　3、白藜蘆醇對心肌組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達的影響
　　與I/R組相比，Res組Bc1-2蛋白表達顯著升高(P<0.05)，Bax/Bc1-2低于I/R組(P<0.05)，加入PI3K-Akt信號通路的特異性阻斷劑渥曼青霉素后，與Res組相比，Bc1-2蛋白表達顯著降低(P<0.05)，Bax/Bc1-2高于Res組；Res+Wom組與I/R

9、組及Wom組相比，Bc1-2蛋白的表達無顯著差異(P>0.05)，Bax/Bc1-2無顯著性差異(P>0.05)
　　4、白藜蘆醇對大鼠缺血再灌注心肌細胞凋亡的影響
　　與IR組比較，Res組心肌細胞凋亡降低(P<0.05)，Res+Wom組和IR+Wom組細胞凋亡差異無統(tǒng)計學意義；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組心肌細胞凋亡增加(P<0.05)。
　　5、白藜蘆醇對心肌組織T-Akt及P-Akt信號蛋

10、白的表達的影響
　　據(jù)實驗結果可知，各組T-Akt差異無統(tǒng)計學意義；與SH組比較，IR組和Res組心肌組織P-Akt蛋白表達增加(P<0.05)；與IR組比較，Res組心肌組織p-Akt蛋白表達明顯增加(P<0.05)；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組心肌組織p-Akt蛋白表達水平降低(P<0.05)。結果表明白藜蘆醇可能是通過激活PI3K-Akt信號通路，增3HPI3K-Akt信號通路上的重要靶點Akt的磷酸化即