電針干預對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護作用及其與PI3K-Akt信號轉(zhuǎn)導通路的關(guān)系.pdf

1、目的:觀察電針刺激“足三里”、“曲池”穴對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護作用及應用PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路抑制劑LY294002,深入探討電針的神經(jīng)保護作用與PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路的關(guān)系。
　　方法:本研究采用Zea Longa線栓法制備大鼠大腦中動脈閉塞(MCAO)缺血再灌注模型，缺血2h后再灌注3d。將60只健康成年SD大鼠隨機分為假手術(shù)組(SC)12只、造模組48只[MCAO模型組(IC)、MCAO+電針組(EA)

2、,MCAO+電針+溶劑組）(DMSO)，MCAO+電針+抑制劑組(LY294002)]:溶劑、抑制劑(10Mn10ul)于造模前30min腦立體定位儀下經(jīng)側(cè)腦室注射，缺血再灌注2h后行神經(jīng)行為學評分，剔除死亡及不合格者，區(qū)組隨機分組為:IC組10只,EA組11只，DMSO組11只,LY294002組12只。術(shù)后24h開始針刺“足三里”、“曲池”穴，再通以電針治療儀予疏密波(1-20Hz)治療30min，1次/天，直到3天后動物處死。采用

3、Zealonga5分評價方法觀察腦缺血再灌注后大鼠神經(jīng)功能缺損恢復程度:TTC腦組織染色法計算腦梗死體積：DeadEndTM熒光標記TUNEL法觀察皮質(zhì)區(qū)缺血周圍神經(jīng)細胞凋亡的情況:應用蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測腦組織中PI3K、Akt、p-Akt、bad、p-bad、Bcl-2，Bax蛋白表達水平:逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)（RT-PCR技術(shù)）檢測大腦bad、Bcl-2,Bax的mRNA表達:運用免疫組化方法觀察皮質(zhì)

4、區(qū)缺血周圍cleaved caspase-3的表達強度。各實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理分析。
　　結(jié)果:神經(jīng)功能評分顯示缺血再灌注72h后,電針組、電針+DMSO組的神經(jīng)行為學評分分別和模型組、電針+DMSO+LY294002組比較有顯著性差異(P＜0.05);TTC染色法顯示電針治療減少了腦梗死體積(P＜0.05)，與模型組、電針+DMSO+LY294002組比較統(tǒng)計有顯著差異（P＜0.05）;說

5、明電針“曲池”、“足三里”穴能有效地改善大鼠腦缺血后神經(jīng)功能障礙，減小腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積，PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002的介入抑制了電針的作用。電針治療穴減弱了缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)缺血周圍神經(jīng)細胞凋亡，這種抗凋亡作用被LY294002阻斷。與假手術(shù)組相比.模型組的凋亡細胞明顯增加，電針治療后凋亡陽性細胞數(shù)大大減少，兩組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，此外電針組凋亡陽性細胞數(shù)明顯少于抑制劑組，差異有顯著性意義(P

6、＜0.01)。電針治療提高了PI3K、p-Akt的蛋白表達及p-bad、Bcl-2的蛋白表達和mRNA表達;并且抑制了Bax的表達水平（P＜0.05);電針組的cleaved caspase-3免疫陽性細胞極明顯少于模型組，LY294002部分的減少了電針抑制caspase-3的活化。所有的結(jié)果數(shù)據(jù)在電針組與電針+溶劑組均未發(fā)現(xiàn)明顯差異:說明電針治療通過激活PI3K/Akt信號通路并調(diào)節(jié)其下游凋亡相關(guān)因子，以此發(fā)揮其抗凋亡的神經(jīng)保護作用