中國南海新型A-超家族芋螺多肽的合成及功能研究.pdf

1、目的：本課題開展中國南海新型A-超家族芋螺多肽的合成、結(jié)構(gòu)測定及功能研究，該工作可為這些多肽新功能的發(fā)現(xiàn)、新型鎮(zhèn)痛藥物及神經(jīng)生物學(xué)工具藥研制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：（1）使用ABI433A合成儀，用Fmoc-固相合成的方法，再通過裂解、空氣氧化一步折疊、富集、純化等合成新型A-超家族芋螺多肽及其突變體。（2）雙電極電壓鉗測定A-超家族芋螺多肽對煙堿型乙酰膽堿受體的作用靶點(diǎn)。（3）兩步氧化折疊法測定A-超家族芋螺多肽的二硫鍵配對方式。

2、
　　結(jié)果：
　?。?）合成了14種A-超家族芋螺多肽的純品，分別是：Bt1.8、Vi1.6、Bt1.10、Lt1.1、Lt1.2、Lt1.3、Lt1.4、Im1.2、Bt14.10、Bt14.11、Bt14.14、Bt14.15、Bt14.19、Em14.1。
　　（2）對其中11種A-超家族芋螺多肽進(jìn)行了煙堿型乙酰膽堿受體靶點(diǎn)的初篩，發(fā)現(xiàn)α-芋螺毒素Bt1.10和Lt1.3作用于煙堿型乙酰膽堿受體α3β2亞型，IC

3、50分別為52.94 nM和44.78 nM，而Bt1.8、Lt1.1和Lt1.2作用于α3β2和α3β4亞型，IC50分別為9.36 nM、166.76 nM和164.74 nM。
　　（3）設(shè)計合成了Bt1.8的4個突變體，分別為：Bt1.8[N5H]、Bt1.8[I9A]、Bt1.8[N11E]和Bt1.8[Q15A]，發(fā)現(xiàn)Bt1.8及其4個突變體對α3β2亞型的活性順序為：Bt1.8[N5H]異構(gòu)體1> Bt1.8>Bt1

4、.8[Q15A]>Bt1.8[N5H]異構(gòu)體2>Bt1.8[I9A]>Bt1.8[N11E]。
　?。?）設(shè)計合成了Vi1.6的4個突變體，分別為：Vi1.6[R1A]、Vi1.6[D2A]、Vi1.6[H11A]和Vi1.6[+16L]，發(fā)現(xiàn)Vi1.6及其4個突變體對α3β2亞型的活性順序為：Vi1.6[+16L]> Vi1.6[R1A]> Vi1.6>Vi1.6[D2A]>Vi1.6[H11A]。
　?。?）對Bt1.8

5、和Vi1.6進(jìn)行了二硫鍵的測定，兩者二硫鍵均為“C1-C3，C2-C4”。
　　結(jié)論：
　?。?）α-芋螺多肽Bt1.8對nAChRα3β2亞型抑制作用很強(qiáng)，其中9位的異亮氨酸、11位的天冬酰胺和15位的谷氨酰胺在其與α3β2的結(jié)合中起關(guān)鍵作用。
　?。?）Vi1.6對α3β2亞型有選擇性抑制作用，其第1位的精氨酸和第11位的組氨酸是功能氨基酸，在其第16位引入疏水殘基能顯著增強(qiáng)其對α3β2亞型的抑制作用。