芋螺毒素的基因克隆、表達(dá)及分離純化的研究.pdf

1、芋螺毒素(conotoxins，CTx)是近年來國際上的一個(gè)研究熱點(diǎn)。它是肉食性軟體動(dòng)物芋螺(conus)分泌出來的能特異性作用于體內(nèi)各種離子通道及神經(jīng)受體的生物活性多肽化合物，通常是由10-46個(gè)氨基酸殘基組成，具有分子量小、結(jié)構(gòu)多樣、富含半胱氨酸、作用靶點(diǎn)廣泛、功能專一、組織特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。目前發(fā)現(xiàn)的芋螺毒素超家族主要有A-，T-，O-，M-，P-，I-和S-超家族等，它們既可以作為體內(nèi)一些具有重要生理功能靶點(diǎn)的探針和“解密器”，也

2、可被直接開發(fā)成為藥物或作為新藥的先導(dǎo)化合物，因此對芋螺毒素的研究有重要的理論和實(shí)際意義。 本文利用RACE方法從大理石芋螺(C.marmoreus)和花瑪瑙芋螺(C.achatinus)克隆得到A-超家族芋螺毒素κA-Ac4.1a/b，O-超家族芋螺毒素Mr6.1和T-超家族芋螺Mr5.2，并對之進(jìn)行序列分析。從大理石芋螺中分離純化得到3個(gè)新的芋螺毒素mr5.2，mr3.5和mr3.6，并對它們進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和氨基酸序列測定。其中

3、mr5.2屬于T-超家族芋螺毒素，有翻譯后加工的形式存在，兩個(gè)Glu被加工成γ-羧基谷氨酸(Gla)，推測Gla可能對芋螺肽的折疊起著重要的作用。分離得到的mr3.5和mr3.6具有CC-C-C-CC的半胱氨酸骨架排列方式，但與先前發(fā)現(xiàn)的M-超家族芋螺毒素(μ-、ψ-和κM-芋螺毒素)存在顯著差異，分子明顯偏短，在第三個(gè)loop只有1個(gè)氨基酸，同時(shí)也沒有類似于mr3a中的GC(_x)PCmotif結(jié)構(gòu)存在，推測mr3.5和mr3.6可能