基于親水性分子印跡膜的丙烯酰胺仿生免疫分析方法研究.pdf

1、丙烯酰胺（AA）是一種合成聚丙烯酰胺和其他共聚物的有機(jī)單體，在食品中一般是富含淀粉類原料經(jīng)過高溫處理生成的有害物質(zhì)，毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明其具有神經(jīng)毒性、致癌性和生殖發(fā)育毒性。2002年4月科研人員報(bào)道在油炸食品中檢測(cè)到大量丙烯酰胺，因此，加強(qiáng)丙烯酰胺的檢測(cè)和控制成為食品安全領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，其形成機(jī)理、毒理特性、檢測(cè)方法和預(yù)防措施等受到國(guó)際的廣泛關(guān)注。
　　本實(shí)驗(yàn)基于仿生酶聯(lián)免疫新技術(shù)，建立了食品中丙烯酰胺快速檢測(cè)新方法。主要研究結(jié)果如下

2、:
　　(1)設(shè)計(jì)合成丙烯酰胺半抗原、仿生抗體。分別以酰胺鍵、雙鍵為連接位點(diǎn)，制備了0C、3C、8C等不同連接臂長(zhǎng)度的4種丙烯酰胺半抗原。以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記酶，采用活潑酯法和戊二醛法分別制備不同位點(diǎn)的酶標(biāo)記物。以水/乙腈溶液(2∶3)為反應(yīng)液、丙烯酰胺為模板分子、甲基丙烯酸(MAA)為功能單體、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)為交聯(lián)劑、偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，利用本體聚合法直接在96孔酶標(biāo)板表面上合成了親水

3、性的丙烯酰胺仿生抗體（分子印跡膜），通過掃描電鏡可以看出，合成的分子印跡膜光滑平整。
　　(2)優(yōu)化丙烯酰胺檢測(cè)實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以酰胺鍵為連接位點(diǎn)、8C為連接臂長(zhǎng)度的酶標(biāo)記物對(duì)丙烯酰胺具有較好識(shí)別能力。在此基礎(chǔ)上，分別對(duì)酶標(biāo)記物稀釋度、稀釋液種類、稀釋液pH進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，得出最佳條件為:酶標(biāo)記物稀釋度為1∶3000，PBS為緩沖液，pH=7.02。
　　(3)建立快速檢測(cè)丙烯酰胺的仿生酶聯(lián)免疫新方法。最佳條件下，該

4、方法的靈敏度(IC50)和最低檢出限(IC15)分別為8.0±0.4mgL-1、85.0±4.2μgL-1。對(duì)甘氨酰胺、丙烯酸、丙酰胺等結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率CR＜16％。本方法在100μgL-1、250μgL-1和500μgL-1三個(gè)濃度水平的添加回收率為90.0～110.5％。對(duì)薯片和餅干進(jìn)行實(shí)際樣品檢測(cè)，濃度分別為0.440±0.016mgkg-1和0.424±0.028mgkg-1，與氣相色譜法(薯片:0.465±0.029mg