基于WNT-PI3K-Akt通路和生長因子PEDF水蛭素調(diào)控HRPE細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的：
　　通過兩個(gè)部分逐步深入觀察水蛭素通過WNT/PI3K/Akt信號通路和生長因子PEDF調(diào)控HRPE細(xì)胞分化情況。
　　方法：
　　第一部分：
　?、俨捎孟囵B(yǎng)法對HRPE細(xì)胞進(jìn)行體外傳代培養(yǎng)和細(xì)胞鑒定。
　?、谠谇捌趯?shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取20U水蛭素作為干預(yù)濃度，隨機(jī)分為3組，水蛭素組，wnt通路抑制組（20U水蛭素+100ng DKK1），空白對照組。對HREP細(xì)胞干預(yù)24小時(shí)，用FCM法檢測細(xì)胞

2、內(nèi)np-β-Catenin蛋白的熒光表達(dá)情況。同時(shí)用ELISA法檢測細(xì)胞外液PEDF表達(dá)情況。
　　第二部分：
　?、俚谝徊糠植孪氤闪?，我們繼續(xù)選取20U水蛭素作為干預(yù)手段進(jìn)行第二部分的深入研究。
　?、谶x取20U水蛭素作為藥物濃度，隨機(jī)分為3組，水蛭素組，wnt通路抑制組（20U水蛭素+100ng DKK1），空白對照組。對HRPE細(xì)胞干預(yù)24小時(shí)，用FCM法檢測細(xì)胞膜上PEDF-R表達(dá)情況。
　?、圻x取20U

3、水蛭素作為藥物濃度，隨機(jī)分為4組，水蛭素組，wnt通路抑制組（20U水蛭素+100ng DKK1），PI3K/Akt通路抑制組（20U水蛭素+100ng SC66），空白對照組。用Western-bloting法檢測np-β-Catenin蛋白、PIP3蛋白和OPN1(LW+MW)蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　水蛭素組np-β-Catenin，PEDF表達(dá)與空白組比較均上調(diào)。wnt通路抑制組np-β-

4、Catenin，PEDF表達(dá)與空白組比較上調(diào)，與水蛭素組比較下調(diào)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　第二部分：
　?、偎嗡亟MPEDF-R表達(dá)與空白組比較均上調(diào)。wnt通路抑制組PEDF-R表達(dá)與空白組比較上調(diào)，與水蛭素組比較下調(diào)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　②水蛭素組np-β-Catenin蛋白，PIP3蛋白，OPN1(LW+MW)蛋白表達(dá)水平較空白組上調(diào)。wnt通路抑制組β-Catenin蛋白

5、，PIP3蛋白，OPN1(LW+MW)蛋白表達(dá)水平較水蛭素組下降，較空白組上調(diào)。PI3K/Akt通路抑制組np-β-Catenin蛋白，PIP3蛋白，OPN1(LW+MW)蛋白表達(dá)水平較水蛭素組下降，較空白組上調(diào)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　20U水蛭素激活HRPE細(xì)胞wnt經(jīng)典信號通路后能夠上調(diào)生長因子PEDF及其受體PEDF-R的表達(dá)。PEDF表達(dá)上調(diào)后與其受體結(jié)合，通過活化PI3K/Akt信號