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文檔簡介
1、目的:探討HBX激活PI3K/Akt信號通路對肝癌細胞增殖和遷移的作用。
方法:(1)應用脂質(zhì)體法將pcDNA3.1、pcDNA3.1-X分別轉(zhuǎn)染Huh-7細胞,經(jīng)G418篩選,克隆,建立陰性對照的細胞模型Huh-7-Mock和穩(wěn)定表達HBX的細胞模型Huh-7-HBX。運用RT-PCR、Western blot和免疫熒光方法檢測細胞模型中HBX mRNA及蛋白表達。(2)運用阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號通路
2、后,用Western blot方法分析Huh-7-HBX細胞中p-Akt蛋白的表達水平,采用CCK-8實驗、平板克隆形成實驗檢測Huh-7-HBX細胞的增殖情況,采用Transwell和劃痕愈合實驗方法觀察Huh-7-HBX細胞的遷移能力。
結(jié)果:(1)經(jīng)RT-PCR、Western blot和免疫熒光檢測結(jié)果均顯示Huh-7-HBX細胞中HBX基因的表達,而Huh-7-Mock細胞中未見HBX基因的表達。(2)Western
3、blot結(jié)果顯示,與Huh-7-Mock細胞相比,Huh-7-HBX細胞中p-Akt蛋白表達增多(P<0.05),經(jīng)阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號通路后,其p-Akt蛋白表達降低(P<0.05)。(3)CCK-8增殖實驗、平板克隆形成實驗結(jié)果顯示,與Huh-7-Mock細胞相比,Huh-7-HBX細胞的增殖能力增加(P<0.05),經(jīng)阻斷劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號通路后,Huh-7-HBX細胞增殖能力減弱
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