綠色木霉生物轉(zhuǎn)化黑木耳多糖衍生物AAPD-6對(duì)糖尿病小鼠生理功能的研究.pdf

1、生物轉(zhuǎn)化技術(shù)已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的生物合成與結(jié)構(gòu)修飾、藥物前體化合物的轉(zhuǎn)化、新藥開發(fā)、藥物代謝研究等多種領(lǐng)域。近年來已有大量文獻(xiàn)顯示經(jīng)生物轉(zhuǎn)化的多種植物多糖具有更強(qiáng)的生物活性，但是利用綠色木霉對(duì)黑木耳多糖（Auricularia auricularpolysaccharides，AAP）進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化的研究目前尚未報(bào)道。本課題擬采用具有降血糖、降血脂、抗氧化等生理活性的黑木耳多糖為原料，綠色木霉為轉(zhuǎn)化菌株，研究探討黑木耳多糖經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后

2、獲得的黑木耳多糖衍生物（Auricularia auricularpolysaccharidesderivative，AAPD）的結(jié)構(gòu)及其生物活性。本文首先從4種綠色木霉菌株中篩選得到轉(zhuǎn)化能力最強(qiáng)的菌株，并研究其最佳轉(zhuǎn)化工藝，通過膜分離技術(shù)將得到的黑木耳多糖衍生物進(jìn)行分級(jí)得到不同分子量大小的片段，以體外降血糖、降血脂、抗氧化等指標(biāo)篩選得到生物活性最佳的黑木耳多糖衍生物片段，采用紅外光譜分析、單糖組成分析手段研究其組成和結(jié)構(gòu)；通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

3、探討黑木耳多糖衍生物的體內(nèi)生物活性，并分析其可能的作用機(jī)制。本研究的主要內(nèi)容如下：
　?。?）篩選得到轉(zhuǎn)化能力最強(qiáng)的菌株是綠色木霉TV2菌株。以其為轉(zhuǎn)化微生物研究綠色木霉生物轉(zhuǎn)化黑木耳多糖制備黑木耳多糖衍生物的最佳工藝為：含水量61.74％，接種量12.36%，溫度31℃，時(shí)間6d，在此工藝條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，轉(zhuǎn)化率可達(dá)26.89%。
　?。?）將轉(zhuǎn)化得到的黑木耳多糖衍生物利用膜分離技術(shù)進(jìn)行分級(jí)，得到不同分子量大小的片段，分

4、別研究其體外降血糖、降血脂能力和抗氧化活性。比較發(fā)現(xiàn)，與AAP對(duì)比，AAPD-6的α-淀粉酶活性抑制率最高，其次為AAPD-5并且均大于AAP。AAPD-3的結(jié)合膽酸鹽能力最高。分子量在AAP D-6之間片段的黑木耳多糖衍生物的總還原能力最強(qiáng)，其次是AAPD-5、AAPD-7。AAPD-6、AAPD-7的羥自由基清除率高于其他分子量大小的多糖衍生物和黑木耳多糖。AAPD-5、AAPD-6的清除ABTS·+自由基能力活性高于AAP。綜合分

5、析不同分子量大小的黑木耳多糖衍生物的三種生理活性篩選得到活性最佳的是AAPD-6，其降血糖、總還原力、清除ABTS·+自由基能力均相對(duì)較強(qiáng)，其中降血糖能力最強(qiáng)。
　　（3）采用紅外光譜分析和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析手段研究黑木耳多糖生物轉(zhuǎn)化得到的黑木耳多糖衍生物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AAP為α-吡喃型，AAPD-6為β-呋喃型。AAPD-6的單糖組成中D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖的含量較高，L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖的含量偏低，且

6、每個(gè)多糖級(jí)分中各個(gè)單糖的摩爾比有顯著區(qū)別，L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖摩爾比為1.34：0.84：0.90：2.52：4.99：2.17。
　?。?）建立鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，口服灌胃AAP和AAP D-6，對(duì)給藥糖尿病小鼠的身體狀況、飲食、血糖、抗氧化和血脂指標(biāo)進(jìn)行分析，得到AAP D-6對(duì)糖尿病小鼠“三多一少”癥狀具有緩解作用，可以提高糖尿病小鼠的糖耐量，降低空腹血糖值的結(jié)論；