外源寡核苷酸對大腸桿菌和雙歧桿菌生長的影響.pdf

1、近年來，核酸營養(yǎng)及安全性人們越來越多的關注。核苷酸對生物體具有多種有益功能，如抗氧化、提高機體免疫力、促進細胞分化、促進腸黏膜生長、減少腹瀉的發(fā)生等，并被廣泛地添加到嬰幼兒的配方奶粉中。然而，日常攝入的飲食中，除了含單核苷酸外，更多的是基因組DNA等大分子核酸，它們經(jīng)胃腸道消化后生成的寡核苷酸將成為腸道微生物面對的主要核酸成分。但有關寡核苷酸對腸道微生物影響的研究較為欠缺，本研究選取了兩種寡核苷酸（長度為39 nt和61 nt），初步探

2、究了其對兩種典型腸道微生物——大腸桿菌和雙歧桿菌生長的影響。主要研究內(nèi)容與結果如下:
　　1.探究寡核苷酸對兩種細菌生長的影響。將兩種寡核苷酸分別加入到大腸桿菌和雙歧桿菌單獨培養(yǎng)的酵母粉缺乏培養(yǎng)基中，根據(jù)平板菌落計數(shù)法研究究其對兩種細菌生長的影響。結果顯示，兩種寡核苷酸對單獨培養(yǎng)的兩種細菌都有促進生長的作用，說明細菌在營養(yǎng)缺乏時能夠利用外源的寡核苷酸。由于腸道中多菌共生，本研究將大腸桿菌和雙歧桿菌混合培養(yǎng)，加入外源寡核苷酸，根據(jù)兩

3、種細菌的16S rRNA和熒光定量PCR技術定量兩種細菌。結果顯示，寡核苷酸對混合培養(yǎng)中的雙歧桿菌有明顯的促進作用，其促進作用明顯高于對大腸桿菌的促進作用，分析原因是雙歧桿菌的生長對大腸桿菌有明顯的抑制作用。
　　2.研究寡核苷酸在細菌中的穩(wěn)定性。通過模擬分析了寡核苷酸在細菌中的存在狀態(tài)，以期研究寡核苷酸以何種形式被細菌利用。具體方法是，超聲破碎細菌，后將寡核苷酸片段加入到破碎的細胞液中，用凝膠電泳檢測其在細胞液中不同時間后的穩(wěn)定

4、性。結果顯示，寡核苷酸進入菌體前在培養(yǎng)液中保持完整的狀態(tài)，直到進入細菌細胞液中才被降解，寡核苷酸在兩種菌液中降解速度的差異可能與兩種細菌液中的核酸酶的種類及濃度有關。
　　3.研究寡核苷酸的講解產(chǎn)物對兩種細菌生長的影響。通過探究寡核苷酸的可能降解產(chǎn)物單核苷酸、核糖、堿基等對細菌生長的影響，分析了寡核酸可能被細菌利用的形式。結果表明，單核苷酸對細菌的作用效果與寡核苷酸相似，其能促進單獨培養(yǎng)的兩種細菌的生長并且能促進混合培養(yǎng)細菌中雙歧

5、桿菌的生長;核糖和堿基對雙歧桿菌促生長作用不如單核苷酸明顯。因此，寡核苷酸進入細菌后被利用的主要形式可能是其降解產(chǎn)生的寡核苷酸或單核苷酸產(chǎn)物。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中營養(yǎng)缺乏時，完整的外源寡核苷酸能被大腸桿菌和雙歧桿菌直接吸收，并可能通過寡核苷酸在菌體內(nèi)的降解獲得更小的寡核苷酸或單核苷酸，進而被菌體利用，促進細菌的生長;在混合培養(yǎng)的細菌體系中，相比大腸桿菌外源寡核苷酸能夠顯著促進有益菌——雙歧桿菌的生長，同時雙歧桿菌能