轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆異黃酮差異分析.pdf

1、本文以普通大豆和轉(zhuǎn)基因大豆為研究對象，利用超聲波輔助提取大豆中的異黃酮，建立了高效液相色譜-電噴霧離子源-離子阱多級質(zhì)譜聯(lián)用儀(HPLC-ESI-MSn)分離鑒定大豆中大豆異黃酮的方法，為大豆的深層次開發(fā)奠定了基礎，也為以大豆異黃酮為研究對象評價轉(zhuǎn)基因大豆的安全性提供了理論支持。
　　通過單因素和正交實驗，確定了大豆異黃酮的最佳提取工藝條件:料液比1∶40、提取時間50.00min、乙醇濃度70％、提取溫度30℃。該條件下的總大豆

2、異黃酮的得率為0.69％。
　　實驗優(yōu)化了液相色譜部分和質(zhì)譜部分的各項儀器參數(shù)，建立了大豆異黃酮的液質(zhì)聯(lián)用分離鑒定方法。色譜柱型號為ZORBAXSB-C18（2.1mm×150mm，3.5μm）;柱溫35℃;流速0.2mL/min;自動進樣10.00μL;流動相為乙腈(A)和含0.025％甲酸的水(pH2.8)(B);梯度洗脫條件如下:0～10min10％～20％A;10～13min20％A;13～20min20％～45％A;20

3、～25min45％～55％A;25～30min55％～10％A并維持10min，二極管陣列檢測器(PDA)全掃描波長為200～500nm。質(zhì)譜掃描模式為正離子模式;全掃描質(zhì)荷比(m/z)范圍為200～700;對主要峰進行二級和三級質(zhì)譜分析時，碰撞歸一化能量為45％，最終得到大豆異黃酮標準品的多級裂解規(guī)律。
　　根據(jù)大豆異黃酮的質(zhì)譜裂解規(guī)律，高效液相色譜保留時間、多級質(zhì)譜碎片信息等，本實驗共鑒定出12種大豆異黃酮，分別為:大豆苷元、