大豆異黃酮指紋圖譜研究.pdf

1、大豆異黃酮為近年來國內外中藥研究的熱點之一。本實驗收集了25個不同品種的大豆樣品，進行了異黃酮類化合物的提取，采用紫外分光光度法、高效液相色譜法以及液相色譜-質譜分析手段，從含量測定、指紋圖譜不同角度研究了大豆作為植物藥材的內在品質，為科學評價大豆異黃酮質量提供了有意義的探索。 本實驗首先采用正交試驗方案對大豆異黃酮提取過程中的可能影響因素(乙醇濃度、料液比、提取時間以及提取次數(shù))進行試驗，確定了最佳提取工藝，然后建立了一階導數(shù)

2、光譜法測定大豆異黃酮含量的方法，為大豆異黃酮的質量評價提供了定量依據。 本實驗采用反相高效液相色譜法，在室溫條件下以C18柱(4.6mm×250mm，5μm)為固定相，甲醇-水(冰醋酸調pH為3.2)為流動相進行梯度洗脫，流速0.6mL/min，261nm處進行檢測，建立了大豆乙醇提取物異黃酮的色譜指紋圖譜。實現(xiàn)了包括染料木黃酮在內的23個色譜峰的分離，獲取了該植物藥材中與異黃酮有關的信息，并將所得的色譜數(shù)據進行化學模式識別研究

3、，用系統(tǒng)聚類分析將采集到的大豆樣品分成了3類，表明不同大豆品種之間與異黃酮有關的化學成分之間存在差異。在對色譜數(shù)據進行系統(tǒng)聚類分析的基礎上，采用中國藥典委員會推薦使用的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件”計算了各樣本與對照指紋圖譜的相似度。同時本文還采用對照品、紫外光譜圖以及HPLC-MS定性方法對指紋圖譜中主要色譜峰進行了歸屬研究，確定了主要色譜峰的可能化學結構歸屬。 針對同一中藥樣本在不同實驗室條件下所得的色譜指紋圖譜中色譜保

4、留時間易產生漂移的現(xiàn)象，本實驗對大豆異黃酮指紋圖譜在不同色譜儀及不同色譜柱上保留時間的漂移進行了校準研究。首先選取5個極性適當?shù)幕衔镒鳛闃藴蕵悠?，在不同儀器及不同色譜柱上用已建立的大豆異黃酮HPLC指紋圖譜條件進行測定，對其保留時間進行線性回歸，利用得到的常數(shù)a、b對不同儀器及不同色譜柱上測得的大豆異黃酮指紋譜中峰面積大于總峰面積1.5％的色譜峰的保留時間進行校正，使不同儀器及不同色譜柱上得到的保留時間的最大絕對誤差由5.868min