N-琥珀酰殼聚糖納米粒的制備及其體外活性和抗腫瘤性研究.pdf

1、殼聚糖是一種天然高分子化合物，由甲殼素脫乙酰基而得，由于其低毒性和良好的生物相容性，近階段逐步應(yīng)用于藥物載體等方面的研究。又因?yàn)槠潺嫶蟮姆肿恿亢蜔o(wú)規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)致使其溶解性能較差，因而在醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用受到了限制。N-琥珀酰殼聚糖是殼聚糖的N-?；苌?，由殼聚糖和丁二酸酐合成而得。N-琥珀酰殼聚糖較殼聚糖溶解性能有較大改善，且具備殼聚糖在生物體內(nèi)相容性好、無(wú)毒性和粘附性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此拓寬了殼聚糖的應(yīng)用范圍，是一種性能優(yōu)異、前景開(kāi)闊的載

2、藥體介質(zhì)。
　　 本文首先用間歇式濃堿法對(duì)購(gòu)得的原料殼聚糖進(jìn)行乙?；拿摮苽涞玫礁呙撘阴６葰ぞ厶?，通過(guò)簡(jiǎn)便的酸堿滴定法測(cè)得其脫乙酰度從88.65％提高到97.62％，并對(duì)其進(jìn)行紅外表征，從紅外圖譜分析得乙?；鸦久摮?然后采用雙氧水氧化降解法對(duì)高脫乙酰度殼聚糖進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量的降解，得到不同降解時(shí)間的低相對(duì)分子質(zhì)量殼聚糖，用烏式粘度法測(cè)量高脫乙酰度殼聚糖和低相對(duì)分子質(zhì)量殼聚糖的分子量，得出殼聚糖的分子量隨降解時(shí)間的延長(zhǎng)而大

3、大減小的結(jié)論，之后進(jìn)行紅外表征，從紅外圖譜分析得雙氧水降解法基本保持殼聚糖分子結(jié)構(gòu)的完整;之后進(jìn)行N-琥珀酰殼聚糖的合成實(shí)驗(yàn)及表征，原料選取之前降解20min，分子量為21000的低相對(duì)分子質(zhì)量殼聚糖和丁二酸酐，采用乙酸/丙酮體系，室溫下合成N-琥珀酰殼聚糖，經(jīng)電位滴定法測(cè)量得到其等電點(diǎn)范圍為3～8.2，經(jīng)過(guò)紅外表征，從紅外圖譜上分析得到殼聚糖已經(jīng)已經(jīng)在N-位成功引入琥珀?；苽涞玫繬-琥珀酰殼聚糖，經(jīng)核磁表征，從1H-NMR譜圖分析

4、得到N-琥珀酰殼聚糖的取代度為0.58，經(jīng)熱失重分析，N-琥珀酰殼聚糖的熱分解溫度是256℃。
　　 本文對(duì)N-琥珀酰殼聚糖進(jìn)行了納米化，通過(guò)離子誘導(dǎo)法制備得到具備載藥形態(tài)的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，并對(duì)其載藥性能進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)得到的N-琥珀酰殼聚糖納米粒經(jīng)粒徑測(cè)定達(dá)到149.4nm，表面電位經(jīng)電位分析儀測(cè)量得9.99mv，納米粒體系較為穩(wěn)定，TEM分析納米粒表面形態(tài)，從透鏡照片可以看出納米粒的形態(tài)完整;同時(shí)本文也制備了負(fù)載重組

5、人內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，從透射電鏡照片得出載藥納米粒與空白納米粒形態(tài)不同，載藥性能良好，利用蛋白定量法檢測(cè)N-琥珀酰殼聚糖納米粒的內(nèi)皮抑素包封率，得到納米粒的平均包封率為94.76％。
　　 本文對(duì)N-琥珀酰殼聚糖納米粒進(jìn)行體外細(xì)胞活性評(píng)價(jià)，并對(duì)載重組人內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰殼聚糖納米粒進(jìn)行了體外抗腫瘤活性研究。本文通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)觀察N-琥珀酰殼聚糖納米粒即空白藥物載體對(duì)NIH正常細(xì)胞增殖作用的影響，結(jié)果表明不同濃度的

6、納米粒懸液對(duì)細(xì)胞生殖作用的影響程度不同，但是抑制率都較小，證明N-琥珀酰殼聚糖納米粒對(duì)正常細(xì)胞并無(wú)毒性。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)考察了載內(nèi)皮抑素的N-琥珀酰納米粒的體外抗腫瘤活性，內(nèi)皮抑素是外源性的強(qiáng)效腫瘤血管生成抑制因子，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，載藥載體對(duì)腫瘤細(xì)胞MCF-7生殖作用的抑制要好于同濃度下的內(nèi)皮抑素原液，說(shuō)明以N-琥珀酰殼聚糖納米粒作為載藥載體，內(nèi)皮抑素對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用得到了加強(qiáng)，進(jìn)一步證明了N-琥珀酰殼聚糖納米粒在載藥體研究方面的可行性