載內(nèi)皮抑素殼聚糖納米粒的制備及其抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：制備載內(nèi)皮抑素殼聚糖納米粒，并對其抗血管和抗腫瘤作用進行研究。
　　方法：利用離子凝膠法制備載內(nèi)皮抑素殼聚糖納米粒（ES-NPs），探究負載內(nèi)皮抑素量的不同對納米粒粒徑、包封率、載藥量的影響，選出最佳的制備方案。利用體外透析法，檢測ES-NPs的釋藥特點。并觀察ES-NPs在不同溫度下血清中的穩(wěn)定性。利用MTT法和Transwell實驗，觀察ES-NPs和游離ES對臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）增殖、遷徙的影響。隨后建立Le

2、wis肺癌移植瘤模型，隨機平均分組，采用PBS、內(nèi)皮抑素注射液、ES-NPs和空納米粒對移植瘤進行治療。每2天測量每只小鼠腫瘤的體積，繪制腫瘤生長曲線。21天觀察結(jié)束后，計算抑瘤率，收集腫瘤組織和血清，免疫組化法檢測各組小鼠移植瘤的微血管密度（MVD），ELISA法檢測各組小鼠血清中內(nèi)皮抑素和VEGF濃度。
　　結(jié)果：我們利用離子凝膠法成功制備出負載不同質(zhì)量內(nèi)皮抑素的ES-NPs，通過對各批次納米粒包封率和載藥量的比較，我們發(fā)現(xiàn)，

3、在40mL殼聚糖溶液（1mg/mL）中加入500μL ES（11.2mg/mL）制成的ES-NPs在保證較高包封率的同時也具有合適的載藥量和粒徑，能滿足治療的需要，并且通過加入5％海藻糖凍干后能夠穩(wěn)定保存。納米粒外觀呈球形，分布均勻，在體外具有明顯的緩釋性，7d累積釋放量達到（60.22±2.58）%，并且在血清中能夠穩(wěn)定存在至少48h。MTT實驗顯示，ES-NPs對HUVECs的生長有抑制作用。在藥物作用的最初24h，ES-NPs對

4、HUVECs的抑制作用與游離ES相差不大(p=0.577)。但隨著作用時間的延長，ES-NPs的作用效果明顯優(yōu)于游離ES（p<0.05）。同樣，在transwell實驗中，ES-NPs對HUVECs的遷徙的抑制作用也要明顯強于游離ES，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05）；并且作用時間越長，兩者的作用效果的差距越大。在Lewis肺癌移植瘤模型上，我們觀察到ES-NPs能明顯抑制移植瘤生長。甚至，ES-NPs每7天注射1次的效果都優(yōu)于游離E

5、S連續(xù)注射14天。而ES-NPs連續(xù)注射14天在我們的實驗中取得了最好的治療效果，對移植瘤的抑制率高達63.32%。免疫組化CD31染色結(jié)果顯示，ES-NPs連續(xù)注射14天組腫瘤組織的MVD最低，明顯低于對照組（p<0.001），游離ES組（p<0.001）。與MVD結(jié)果對應(yīng)，ES-NPs連續(xù)注射14天組小鼠血清中的內(nèi)皮抑素水平明顯高于其它各組（p值均<0.05），而VEGF水平明顯低于其它各組（p值均<0.05）。證明了ES-NPs主