N-琥珀酰殼聚糖載siRNA納米?？鼓[瘤作用研究.pdf

1、殼聚糖是一種天然高分子化合物，是甲殼素脫乙?；磻?yīng)的產(chǎn)物，由于其低毒性和良好的生物相容性，近階段逐步應(yīng)用于藥物載體等方面的研究。然而其較大的分子量和無規(guī)則的空間結(jié)構(gòu)致使其溶解性能較差，因此在醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用受到了限制。N-琥珀酰殼聚糖是殼聚糖的N-?；苌?，由殼聚糖和丁二酸酐合成而得。N-琥珀酰殼聚糖較殼聚糖溶解性能有較大改善，且具備殼聚糖在生物體內(nèi)相容性好、無毒性和粘附性強等優(yōu)點，因此拓寬了殼聚糖的應(yīng)用范圍，是一種性能優(yōu)異、前景開闊

2、的載藥體介質(zhì)。
　　本文首先通過乙酸/乙醇體系制備了DS為58％的N-琥珀酰殼聚糖，隨后我們對合成的N-琥珀酰殼聚糖進行體外抗腫瘤的細胞活性評價，通過熒光標記N-琥珀酰殼聚糖，分別測定三種不同的腫瘤細胞MCF-7，A549，H460對N-琥珀酰殼聚糖的攝取量，并通過MTT實驗測定其對腫瘤細胞增殖抑制率。我們對轉(zhuǎn)染時間，轉(zhuǎn)染劑量，轉(zhuǎn)染細胞等條件進行了篩選，確定最終最佳的轉(zhuǎn)染條件為對H460細胞以200μg/mL進行轉(zhuǎn)染。
　　

3、本文對N-琥珀酰殼聚糖進行了納米粒子化，通過自組裝法制備了具有載siRNA能力的N-琥珀酰殼聚糖納米粒，并對其載藥性能進行了研究。實驗所得N-琥珀酰殼聚糖納米粒經(jīng)粒度分析后，所測得的粒徑約分布在150～200nm，表面電位為+8～20mV，納米粒體系較為穩(wěn)定，TEM分析納米粒表面形態(tài)，從透鏡照片可以看出納米粒的形態(tài)完整;通過瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度儀對N-琥珀酰殼聚糖納米粒的載藥性能進行了測試，其中以1∶1比例制得的N-琥珀酰殼聚糖

4、納米粒的載siRNA能力較為優(yōu)秀，包封率達到了95.28％。
　　本文對載以VEGF基因為靶基因的siRNA的N-琥珀酰殼聚糖納米粒進行了抗腫瘤作用研究，將制備的納米粒與H460細胞進行48h，72h共孵育，隨后運用MTT法，ELISA，細胞凋亡及實時定量熒光PCR對載siRNA的納米粒進行了抗腫瘤作用測評。實驗結(jié)果表明，siRNA與N-琥珀酰殼聚糖納米粒結(jié)合后，降低了腫瘤細胞VEGFmRNA的表達量，具有良好的抗腫瘤作用，通過與