抗伏馬菌素B1單克隆抗體的制備及其ELISA檢測試劑盒的研發(fā).pdf

1、伏馬菌素B1（FB1）是由串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）產(chǎn)生且具有肺毒性、神經(jīng)毒性、免疫系統(tǒng)毒性、致癌性等多種毒性的一類真菌毒素。FB1是一種污染范圍較廣的真菌毒素，主要污染玉米及其制品，也可污染小麥、稻米等糧食及其制品。由于FB1分布廣泛且毒性較大，且對人類以及動物都能產(chǎn)生毒性，因此它在食品安全中越來越受到人們關注。國際癌癥研究中心（IARC）已經(jīng)把FB1確定為2B類致癌物（有可能使人類誘發(fā)癌癥）。目前，對 F

2、B1的檢測主要建立在儀器測量上，由于儀器設備價格昂貴且操作復雜，因此有一定局限性。以單克隆抗體為基礎的免疫學檢測方法不僅克服了上述難題，而且靈敏度更高，有利于推廣普及。
　　本研究利用實驗室保存的能分泌抗FB1單克隆抗體的細胞株4G5，進一步篩選出能穩(wěn)定分泌單抗且效價更高的細胞株4G5-A4，并制備純化出抗FB1單克隆抗體。抗體純化前蛋白濃度為12.58 mg/mL，純化后抗體濃度為1.62 mg/mL，IgG回收率為25.63%

3、，亞類為IgG2b，親和力為1.28×108 L/mol；單抗與AFB1、CIT、CTX、DON沒有交叉反應，與T2毒素有輕微的交叉反應現(xiàn)象。本研究獲得的抗FB1單克隆抗體品種優(yōu)良，為進一步建立FB1的ELISA檢測技術奠定了基礎。
　　利用所獲得的抗FB1單克隆抗體，建立間接競爭ELISA檢測方法，優(yōu)化參數(shù)條件。其中抗原包被濃度0.05μg/mL，一抗稀釋度為1:4000。該檢測方法對FB1的檢測線性范圍為1.29～804.38