新城疫間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研究.pdf

1、利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原,通過間接ELISA方法對(duì)試劑盒的各項(xiàng)反應(yīng)條件進(jìn)行系列的摸索試驗(yàn)后,成功地組裝了檢測(cè)試劑盒.對(duì)ELISA各項(xiàng)反應(yīng)條件進(jìn)行摸索,并確定了最適工作條件,研究結(jié)果表明,新城疫病毒抗原最佳包被濃度為1.086ug/ml,最適包被條件為4℃過夜,被檢血清最佳稀釋度為1:100,酶標(biāo)結(jié)合物最佳工作濃度1:800.待檢血清和酶標(biāo)二抗的反應(yīng)時(shí)間均為37℃ 30分鐘,底物的反應(yīng)時(shí)間為37℃ 15分鐘.采用已確立的EL

2、ISA反應(yīng)條件,檢測(cè)14份經(jīng)西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒檢測(cè)為陰性的血清,依據(jù)陰陽(yáng)性臨界值=陰性血清OD平均值+3SD,確定陰陽(yáng)性臨界值為0.34.用Lasota株全病毒進(jìn)行阻斷試驗(yàn)結(jié)果表明,Lasota株病毒能夠阻斷陽(yáng)性血清與包被的Clone30株病毒的結(jié)合反應(yīng).用此方法檢測(cè)E.coli的O<,1>、O<,2>、O<,78>,AI H<,9>,EDS<,76>,IBD的單因子雞血清,均為陰性,無交叉反應(yīng),說明建立的ELI

3、SA具有很好的特異性.用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒同時(shí)對(duì)64份血清樣本進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果表明,建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為90﹪和93.2﹪.同時(shí),用已建立的ELISA方法與HI方法對(duì)80份血清樣本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明ELISA的效價(jià)對(duì)數(shù)與HI效價(jià)對(duì)數(shù)呈線性回歸關(guān)系,二者的相關(guān)系數(shù)(r)為0.91.試劑盒的保存期試驗(yàn)結(jié)果表明,試劑盒可以保存到三個(gè)月.該研究建立了一種經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方