抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備及其性質的鑒定.pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）主要是由黃曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）產生的毒性極強的次生代謝產物，黃曲霉毒素是一類結構類似的化合物的總稱。在黃曲霉毒素家族中，常見的有黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2等。早在1988年黃曲霉毒素B1被國際腫瘤研究機構（IARC）定為一級致癌物。傳統(tǒng)的檢測方法不但耗時耗力，成本偏高，而且還需要專業(yè)技術人員對分析

2、儀器進行操作。采用免疫化學分析法進行檢測則可以克服以上缺點。本文旨在篩選出能分泌抗AFB1的高親和力的單克隆抗體細胞株，為建立免疫化學檢測方法打下基礎。
　　首先用碳二亞胺法（EDC）構建了兩種完全抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，其中AFB1-BSA作為免疫原免疫兩只8周齡BALB/C雌性小鼠四次，AFB1-OVA作為包被原包被酶標板，iELISA法測定免疫小鼠血清效價。加強免疫后，兩只小鼠的效價分別達到了128000和3

3、2000。采用PEG（4000）法將SP2/0骨髓瘤細胞和免疫小鼠脾臟細胞進行融合，HAT篩選培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，經(jīng)過3~4輪篩選得到三株能穩(wěn)定分泌抗AFB1單克隆抗體的雜交瘤細胞株：1B7、5A8、5B8。其中，1B7和5A8細胞株分泌的單克隆抗體為IgM亞型，5B8細胞株分泌的抗體為IgG1亞型。為便于后期純化，本次實驗采用5B8細胞株進行后續(xù)實驗。經(jīng)測定，5B8細胞株分泌的單克隆抗體效價達到20,0000，親和力為7.96×108。將