阿昔莫司對巨噬細胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1表達及其調(diào)控的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的早期特征性病理改變，是單核-巨噬細胞過度聚集脂質(zhì)而轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎?，因此促使細胞?nèi)膽固醇流出即膽固醇逆轉(zhuǎn)運(RCT)，能延緩AS的發(fā)生發(fā)展，是目前抗AS的主要機制之一。RCT是使外周細胞中多余的膽固醇從細胞內(nèi)流出，與血漿脂蛋白結(jié)合，形成HDL，轉(zhuǎn)運至肝臟，通過膽汁分泌排出體外。其中ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1(ABCA1)是此過程中的一種重要轉(zhuǎn)運蛋白，ABCA1介導(dǎo)細胞內(nèi)膽固醇流出，由此啟動

2、RCT過程。ABCA1在體內(nèi)受多種因素調(diào)控，調(diào)節(jié)因子中研究最多的是肝臟X受體(LXR)，有LXRα、LXRβ兩種亞型，LXRα發(fā)揮主要作用，能上調(diào)ABCA1的表達。
　　煙酸類藥是最早應(yīng)用于臨床的調(diào)脂藥，阿昔莫司為煙酸類衍生化合物，臨床應(yīng)用不良反應(yīng)較煙酸低。煙酸類藥具有廣泛而顯著的降脂效果，與其它調(diào)脂藥相比，煙酸上調(diào)HDL的作用最為顯著，還有大量降脂效應(yīng)外的抗AS效應(yīng)。但眾多不良反應(yīng)限制了它的應(yīng)用，隨著煙酸緩釋劑及復(fù)合制劑的問世，

3、大大降低了煙酸類藥物的副作用，煙酸類藥的作用又被重新認(rèn)識和評價。已有研究表明煙酸能促使細胞內(nèi)膽固醇流出，煙酸的這種作用可為解釋其升高HDL的機制提供方向，但煙酸類藥促使細胞內(nèi)膽固醇外流的相關(guān)機制尚不太明確。
　　[目的]：
　　本實驗以RAW264.7巨噬細胞為研究對象，研究不同濃度阿昔莫司作用下，巨噬細胞內(nèi)ABCA1的mRNA及蛋白表達的變化，進一步了解阿昔莫司對ABCA1上游調(diào)控因子LXRα的mRNA及蛋白表達的影響，從

4、而探討阿昔莫司促進細胞內(nèi)膽固醇流出，抗動脈粥樣硬化的可能機制。
　　[方法]：
　　1.體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細胞。
　　2.在體外，分別將不同濃度阿昔莫司與巨噬細胞共培養(yǎng)24h，提取各組細胞總RNA和蛋白質(zhì)。
　　3.用RT-PCR技術(shù)測定各組ABCA1、LXRαmRNA水平。
　　4.用Western-blot技術(shù)測定各組ABCA1、LXRα蛋白表達。
　　5.用閃爍計數(shù)法測定細胞內(nèi)膽固醇流

5、出率。
　　6.統(tǒng)計學(xué)分析。
　　[結(jié)果]：
　　1.通過半定量RT-PCR檢測顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組ABCA1的mRNA水平較對照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(P<0.05)。
　　2.通過半定量RT-PCR檢測顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組LXRα的mRNA水平較對照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(P<0.05)。
　　3

6、.通過Western-blot檢測顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組ABCA1蛋白表達較對照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(P<0.05)。
　　4.通過Western-blot檢測顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組LXRα蛋白表達較對照組明顯升高(P<0.05)，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(P<0.05)。
　　5.閃爍計數(shù)法測定細胞內(nèi)膽固醇流出率，結(jié)果顯示，不同濃度阿昔莫司干預(yù)組細

7、胞內(nèi)膽固醇流出率較對照組均明顯增高，且此作用隨著阿昔莫司濃度的增加而逐漸增強(P<0.05)。
　　[結(jié)論]：
　　實驗證實，阿昔莫司能濃度依賴性地上調(diào)RAW264.7巨噬細胞ABCA1的mRNA及蛋白表達，同時阿昔莫司還能濃度依賴性地上調(diào)ABCA1的上游調(diào)控因子LXRα的mRNA及蛋白表達，阿昔莫司能通過LXRα通路上調(diào)ABCA1的表達，從而促進細胞內(nèi)膽固醇外流，抑制泡沫細胞的形成，阿昔莫司的這種有益效應(yīng)可為延緩AS提供實