TREM-1的表達對大鼠腸巨噬細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　通過體外細胞實驗研究髓系細胞觸發(fā)受體-1(Triggering receptor expressed onmyeloid cells-1，TREM-1)的表達對大鼠腸巨噬細胞凋亡的影響，并通過LP17可抑制TREM-1信號通路的激活，探討炎癥環(huán)境下腸黏膜屏障損傷治療的新靶點。
　　方法:
　　(1)體外分離腸巨噬細胞，臺盼藍染色并計數(shù)，待巨噬細胞生長狀態(tài)良好后免疫熒光鑒定并拍照。
　　(2)將大鼠腸巨

2、噬細胞分組培養(yǎng)并以不同藥物處理:①空白對照組(Control組):加入200ul含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基;②a實驗組（LPS組）:培養(yǎng)液中加入LPS，濃度為1 mg/L;③b實驗組（LPS+LP17組）:用LP17及LPS聯(lián)合處理正常狀態(tài)下的大鼠腸巨噬細胞，加藥濃度為LPS:1 mg/L，LP17:0.1 mg/L。
　　(3)上述藥物處理后的腸巨噬細胞培養(yǎng)6小時，通過熒光定量-多聚酶鏈反應(Fluorescen

3、ce quantitative-polymerase chain reaction，F(xiàn)Q-PCR)檢測各組腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)的基因表達水平，TUNEL一步法檢測大鼠腸巨噬細胞凋亡情況，熒光顯微鏡下觀察并記錄。按上述分組腸巨噬細胞收集處理，流式細胞儀檢測細胞凋亡，分析記錄熒光強度。
　　結果:
　　(1)大鼠腸巨噬細胞體外分離后分布均勻，生長狀態(tài)良好，細胞活力可，符合

4、實驗要求。
　　(2)經(jīng)藥物處理后后LPS組TNF-α的基因表達水平高于LPS+LP17組和對照組(均P＜0.05); LPS+LP17組與對照組對比無差異。
　　(3)應用PI染色法檢測腸巨噬細胞凋亡情況，顯示LPS組凋亡巨噬細胞較空白對照組明顯增多，LPS+LP17腸巨噬細胞的凋亡細胞比LPS組稍減少。
　　(4)流式細胞儀檢測分析腸巨噬細胞凋亡情況，對照組(C)，實驗組(LPS和LPS+LP17)中腸巨噬細胞的凋

5、亡率分別為:6.76％，15.22％和10.52％。LPS組與空白對照組相比差異有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，LPS組與LPS+LP17組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　脂多糖(LPS)可以刺激腸巨噬細胞TREM-1的表達，模擬炎癥環(huán)境下腸道生理狀態(tài)，促進腸巨噬細胞的凋亡，TREM-1特異性阻斷劑LP17能有效抑制TREM-1的表達，減少腸巨噬細胞的凋亡，減輕腸黏膜的損傷，有望成為治療腸屏障功能障礙的