2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、螺旋藻、節(jié)旋藻系藍(lán)藻門(mén)(Cyanophyta),段殖藻目(Hormogonales),顫藻科(Oscilatoraceae),是光合自養(yǎng)型原核微生物。人們借助于16S rRNA、16S-23S rRNA(ITS區(qū))、cpcB、cpcA、hoxY、psbA、cpcE-F等基因序列分析,發(fā)現(xiàn)螺旋藻、節(jié)旋藻在屬水平上具有明顯差別,認(rèn)為螺旋藻、節(jié)旋藻應(yīng)為獨(dú)立的兩個(gè)屬。但關(guān)于種定義的問(wèn)題仍在爭(zhēng)論。本實(shí)驗(yàn)室在獲得大量新藻株的基礎(chǔ)上,欲采用多相分類(lèi)方

2、法,構(gòu)建相對(duì)完善的螺旋藻、節(jié)旋藻種屬分類(lèi)系統(tǒng)。課題組成員首先基于16S rRNA基因、ITS區(qū)、rpoC1基因、cpcB基因、psbA基因、hoxY基因序列分別構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),均支持螺旋藻、節(jié)旋藻獨(dú)立為兩個(gè)不同屬的觀點(diǎn)。但是,個(gè)別藻株的歸屬不穩(wěn)定,且屬內(nèi)藻株的基因序列相似性較高,無(wú)法確定不同種。因此為了驗(yàn)證基于基因序列分類(lèi)的準(zhǔn)確性,進(jìn)一步尋找種水平分類(lèi)的靶標(biāo)分子,本課題以渤海海濱濕的螺旋藻、節(jié)旋藻藻株為研究對(duì)象,檢測(cè)其脂肪酸組成及含量,

3、通過(guò)聚類(lèi)分析尋找特征脂肪酸,并以脂肪酸為標(biāo)記進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,豐富螺旋藻、節(jié)旋藻的分類(lèi)依據(jù)和方法,以期獲得更能反映藻株親緣關(guān)系的分類(lèi)結(jié)果。
  本研究主要內(nèi)容包括:⑴藻株的分離純化:從在渤海海濱濕地及其周邊水域采集的水樣中,分離純化獲得34株單藻絲純種,擴(kuò)大了本研究的樣本量,并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)特征進(jìn)行了研究;⑵脂肪酸檢測(cè)方法的建立:首先對(duì)比了VF-23MS與HP-88兩種色譜柱對(duì)37種脂肪酸甲酯的分離效果,選取了能將37種脂肪酸甲酯有

4、效分離的HP-88色譜柱,并確立了最優(yōu)色譜條件,即進(jìn)樣口:加熱器250℃,分流比8:1;控制模式為流速控制,流速為0.5mL/min,柱前壓19.783psi;升溫程序:初始溫度100℃,保持4min,以8℃/min上升至175℃,保持7min,然后以1℃/min上升至186℃,保持3min,最后以5℃/min升至230℃,保持30min;檢測(cè)器溫度(FID)260℃。其次,在脂質(zhì)萃取過(guò)程中,考察了不同溶劑的萃取效果,依據(jù)脂質(zhì)提取率和色

5、譜圖質(zhì)量,最終確定正己烷為提取藻株脂肪酸的萃取溶劑。再次,Central Composite響應(yīng)面優(yōu)化螺旋藻脂肪酸提取條件,建立回歸模型,獲得優(yōu)化方案,即超聲時(shí)間21min,水浴時(shí)間93min,催化劑濃度1.8%,甲酯化溫度70℃,在此優(yōu)化條件下進(jìn)行6次平行試驗(yàn),得到平均峰面積為31008.1667,與理論值相比,其平均偏差為5.59%。最后,對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn),在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下回收率為94.56%~103.23%,表明該

6、方法回收率比較穩(wěn)定,為后續(xù)的脂肪酸檢測(cè)提供了依據(jù);⑶螺旋藻、節(jié)旋藻藻株分類(lèi):應(yīng)用本研究建立的檢測(cè)方法對(duì)84株供試藻株進(jìn)行脂肪酸提取、氣相色譜分析,最后通過(guò)聚類(lèi)分析,尋找可用于螺旋藻(節(jié)旋藻)屬種類(lèi)的脂肪酸生物標(biāo)記。研究表明:F-351、F-1070兩藻株不含C18:3n6,結(jié)合基于16S rRNA基因、ITS區(qū)等分子方法的聚類(lèi)結(jié)果,進(jìn)一步支持節(jié)旋藻、螺旋藻兩屬之間的差異性脂肪酸成分為γ-亞麻酸的觀點(diǎn);節(jié)旋藻屬脂肪酸組分除含有γ-亞麻酸(

7、C18:3n6)這一特征組分外,均有高含量的C16:0;另外,大部分藻株也含有C16:1、C18:0、C18:1n9c、C18:2n6c;以10個(gè)脂肪酸統(tǒng)計(jì)參數(shù)為指標(biāo)對(duì)節(jié)旋藻屬藻株進(jìn)行聚類(lèi)分析,將81個(gè)供試藻株劃分為5個(gè)脂肪群;并通過(guò)聚類(lèi)分群分析發(fā)現(xiàn),以脂肪酸為標(biāo)記的分類(lèi)結(jié)果與基于 psbA基因序列的聚類(lèi)結(jié)果存在一定的一致性;依據(jù)脂肪酸分析,修正藻株TJBC3的分類(lèi)地位,該藻株應(yīng)歸為螺旋藻屬;針對(duì)基于psbA基因序列及聯(lián)合基因分析提出的

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