基于3T3-L1細(xì)胞的花椒籽仁油PUFA降脂活性及氧化損傷影響研究.pdf

1、花椒籽含有豐富的油脂和蛋白質(zhì)，其理論產(chǎn)量比花椒果皮高出20％，年產(chǎn)量約60萬(wàn)噸，但它在花椒加工生產(chǎn)中常常被當(dāng)作廢棄物進(jìn)行填滿或者焚燒處理，既極大的浪費(fèi)了有用資源，又造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。如何將這一營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、產(chǎn)量大的資源進(jìn)行合理的開發(fā)利用，是眾多領(lǐng)域的專家共同關(guān)注的問(wèn)題。
　　本實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行花椒籽深度開發(fā)時(shí)通過(guò)螺旋壓榨制得香味醇厚純天然的高營(yíng)養(yǎng)保健食用油——花椒籽仁油，發(fā)現(xiàn)花椒籽仁油中含有豐富的多不飽和脂肪酸(polyunsatur

2、atedfattyacids，PUFA)，其n-3系的α-亞麻酸(34.0％)和n-6系的亞油酸(29.9％)的比例約為1∶1，并且采用乙醇鈉催化法和硝酸銀絡(luò)合法制得的花椒籽仁油多不飽和脂肪酸乙酯(PUFAEE)中n-3系的α-亞麻酸乙酯與n-6系的亞油酸乙酯的比例約為5∶1，本文在此基礎(chǔ)上利用3T3-L1前脂肪細(xì)胞模型研究花椒籽仁油PUFA和PUFAEE的降脂活性。首先研究純度較高的n-3系PUFA（如α-亞麻酸，α-Linoleni

3、cacid，ALA）和n-6系PUFA(如亞油酸，linoleicacid，LA)對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖和分化的影響，然后再檢驗(yàn)花椒仁油PUFA和PUFAEE干預(yù)3T3-L1細(xì)胞增殖和分化的作用，最后嘗試從脂質(zhì)過(guò)氧化作用造成氧化損傷的角度探討PUFA影響3T3-L1細(xì)胞分化的機(jī)理。
　　(1)n-3/n-6系PUFA對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖分化的影響研究
　　本文以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為模型，采用MTS比色分析法和細(xì)胞形態(tài)學(xué)

4、分析方法，研究不同濃度ALA、LA對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響;同時(shí)利用3T3-L1細(xì)胞在地塞米松、胰島素和黃嘌呤的誘導(dǎo)下可特異性分化為成熟脂肪細(xì)胞，然后通過(guò)油紅O染色，間接反應(yīng)不同濃度的ALA、LA和1∶1ALA/LA混合脂肪酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響。MTS結(jié)果顯示，ALA、LA均能顯著抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖，在無(wú)明顯細(xì)胞毒性的濃度范圍內(nèi)呈劑量-效應(yīng)關(guān)系，在24-72h范圍內(nèi)表現(xiàn)出時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，且ALA抑

5、制效果強(qiáng)于LA;細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析結(jié)果顯示，ALA、LA在高濃度時(shí)均顯示出細(xì)胞毒性作用;倒置顯微鏡觀察和油紅染色檢測(cè)結(jié)果顯示，ALA、LA和1∶1ALA/LA混合脂肪酸均表現(xiàn)出顯著抑制3T3-L1細(xì)胞分化的作用效果，在12.5-200μM濃度范圍內(nèi)呈濃度-效應(yīng)關(guān)系，且ALA抑制分化作用強(qiáng)于LA，但當(dāng)濃度＞100μM時(shí)，1∶1ALA/LA混合脂肪酸的抑制分化作用強(qiáng)于同濃度的ALA。
　　(2)花椒籽仁油PUFA和PUFAEE干預(yù)3T3-

6、L1細(xì)胞增殖分化的效果研究
　　花椒籽仁油PUFA和PUFAEE分別以100μM、200μM、400μM干預(yù)3T3-L1細(xì)胞增殖過(guò)程。MTS結(jié)果顯示，花椒籽仁油PUFA和PUFAEE均能抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖，在無(wú)細(xì)胞毒性的濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系;細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，花椒籽仁油PUFA在400μM時(shí)表現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用，而花椒籽仁油PUFAEE在400μM未見(jiàn)細(xì)胞毒性作用;分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，花椒籽仁油PUFA和P

7、UFAEE均能在200μM下表現(xiàn)出對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的抑制作用，且花椒籽仁油PUFAEE的抑制作用強(qiáng)于同濃度的花椒籽仁油PUFA。
　　(3)花椒籽仁油PUFA和PUFAEE對(duì)3T3-L1分化過(guò)程中氧化損傷的影響研究
　　通過(guò)測(cè)定花椒籽仁油PUFA和PUFAEE干預(yù)3T3-L1分化過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)的丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽(GSH)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)酶活，考察其對(duì)3T3-L1分化過(guò)程中氧化損傷的影響