傳統(tǒng)酒曲中高產(chǎn)乳酸根霉菌株的選育及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、乳酸是世界三大有機(jī)酸之一，被廣泛應(yīng)用于各工業(yè)中，如食品、化工、醫(yī)藥、環(huán)保等。微生物發(fā)酵法是工業(yè)化生產(chǎn)乳酸的主要方法，目前，用于發(fā)酵產(chǎn)乳酸主要有乳酸細(xì)菌及根霉菌。用于發(fā)酵產(chǎn)乳酸的根霉菌中多見(jiàn)報(bào)道的為米根霉，偶見(jiàn)報(bào)道的只有華根霉和少根根霉，但它們產(chǎn)乳酸量較低，離開(kāi)發(fā)應(yīng)用還有較大差距。因此，篩選出新的有潛力并滿足未來(lái)工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用的乳酸高產(chǎn)根霉菌種有著重大意義。據(jù)此本文從以下4個(gè)階段展開(kāi)了研究工作。
　　由于傳統(tǒng)酒曲中有著豐富的種質(zhì)資源，

2、于是本文選擇酒曲為分離源，從中分離出60株霉菌單菌落。經(jīng)過(guò)高錳酸鉀-溴化鉀平板初篩，搖瓶發(fā)酵復(fù)篩，獲得一株乳酸產(chǎn)量高達(dá)52.33g/L的霉菌菌株G10。通過(guò)PDA平板培養(yǎng)及玻片培養(yǎng)法觀察菌落形態(tài)及其個(gè)體形態(tài)，結(jié)合18SrDNA基因測(cè)序方法對(duì)菌株G10進(jìn)行鑒定，確定分離到的霉菌菌株G10為根霉屬小孢根霉(Rhizopus microsporus)。
　　首先以致死率為依據(jù)設(shè)定誘變條件，對(duì)G10進(jìn)行紫外誘變，經(jīng)篩選后得到突變菌株Z2，

3、產(chǎn)酸量達(dá)66.99g/L。再對(duì)Z2進(jìn)行DES二次誘變，得遺傳穩(wěn)定的突變菌株D11，產(chǎn)酸量達(dá)73.29g/L，比出發(fā)菌株高出40.05％。
　　通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)D11的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，所得最佳培養(yǎng)基組成為：葡萄糖120g/L，(NH4)2SO44g/L，KH2PO40.4g/L，MgSO4·7H2O0.3g/L，ZnSO4·7H2O0.4g/L，CaCO350.0g/L。最佳培養(yǎng)條件為：裝液量50mL/250mL，接種

4、量10%，溫度32℃，轉(zhuǎn)速200r/min。經(jīng)優(yōu)化后D11產(chǎn)酸量達(dá)80.91g/L。
　　以玉米芯為載體，固定化小孢根霉D11發(fā)酵產(chǎn)乳酸，對(duì)載體參數(shù)及發(fā)酵條件進(jìn)行了探討，所得的最佳培養(yǎng)基配比為：玉米芯添加量2g/L，玉米芯粉碎粒度40目，葡萄糖120g/L，(NH4)2SO42g/L，KH2PO40.3g/L，MgSO4·7H2O0.1g/L，ZnSO4·7H2O0.3g/L，CaCO360g/L。最佳培養(yǎng)條件為：裝液量50mL/