視黃醇X受體α依賴的HBV微染色體重塑與病毒復制.pdf

1、背景和目的:乙型肝炎病毒(HBV)共價閉合環(huán)狀DNA(HBVcccDNA)、組蛋白和非組蛋白共同作用組裝成病毒微染色體。視黃醇X受體α(RXRα)是作為一種肝細胞核轉錄因子，參與了HBV復制與轉錄的調控。本研究致力于在RXRα已被證實與病毒復制具有直接相關的基礎上探索其是否并如何參與到HBVcccDNA微染色質重塑，期望對新型抗病毒藥物的研究提供一些理論及實驗基礎。
　　方法:線性HBV全長基因組DNA轉染HepG2細胞，建立HB

2、V非載體細胞復制模型;與RXRα真核表達質粒(pRs-hRXRα)和shRNA載體分別共轉染建立RXRα高表達及基因沉默HBV復制系統(tǒng)。在三種不同系統(tǒng)下，采用HBVcccDNA染色質免疫沉淀(ChIP)技術聯合實時定量PCR方法，進行RXRα依賴的HBV復制與病毒微染色質重塑的相關性探索。
　　結果:
　　(1)線性HBV全長基因組DNA轉染后成功啟動了HepG2細胞內完整的HBV復制與轉錄活動，表明了HBV非載體細胞復制模

3、型的成功建立。
　　(2) RXRα直接結合到HBV微染色質上從而對病毒復制與轉錄活動發(fā)揮重要的調控作用。
　　(3) HBV cccDNA微染色質中檢測到組蛋白招募和乙?；膭討B(tài)變化。
　　(4) RXRα基因過表達及基因沉默直接影響了HBV微染色質中組蛋白結合及其乙?；?，且與HBV復制明顯相關。
　　結論:我們的研究證實了RXRα對HBV體外復制活動的調控作用以及對HBV微染色質重塑的重要影響，對于作用于