沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥治療作用的機(jī)理探討.pdf

1、目的
　　 探討具有溫補(bǔ)腎陽作用的單味中藥.沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥的治療作用,并從破骨細(xì)胞分化調(diào)控因子、與骨代謝密切相關(guān)的激素和細(xì)胞因子等角度,揭示它們治療的作用機(jī)理以及作用特點(diǎn),為中醫(yī)藥防治骨質(zhì)疏松癥提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法
　　 選用雌性Wistar大鼠94只,隨機(jī)分為3組:空白對(duì)照組12只,假手術(shù)組12只,造模組70只。在術(shù)后1個(gè)月,將造模組大鼠隨機(jī)分為6組,即模型組

2、、陽性對(duì)照組、沙苑子組和狗脊組,每組各12只,肉蓯蓉組和韭菜子組,每組各11只。然后,開始灌胃給藥:各中藥組給予濃度為1g生藥／mL的水煎劑,給藥體積為5.6mL／kg體重,即給藥劑量均為5.6g生藥／kg體重；陽性對(duì)照組給予0.008mg／mL的己烯雌酚,給藥體積為5.6mL／kg體重,即給藥劑量為0.0448mg／kg體重。以上給藥1d1次,連續(xù)6d,休息1d后,如此給藥3個(gè)月?？瞻讓?duì)照組、假手術(shù)組、模型組按同法灌服等體積的蒸餾水。

3、
　　 各組大鼠于處死前15d和前3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg／kg體重,對(duì)骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后,將大鼠以45mg／kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股動(dòng)脈取血,用于檢測外周血清中IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH的含量。然后,將各組大鼠處死,取右側(cè)脛骨制作不脫鈣骨切片,用于骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的檢測；取左側(cè)脛骨制作冰凍切片,用于成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKL蛋白及其mRNA表達(dá)的檢測。
　　

4、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法:實(shí)驗(yàn)結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行處理,組間兩兩比較,采用q檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果
　　 1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響
　　 1.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨TBV％的影響
　　 模型組大鼠脛骨TBV％較假手術(shù)組明顯降低。與模型組比較,沙苑子組、狗脊組和陽性對(duì)照組的大鼠脛骨TBV％顯著增加

5、；而肉蓯蓉組和韭菜子組則無顯著性差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TBV％明顯低于假手術(shù)組；沙苑子組、陽性對(duì)照組較假手術(shù)組則無顯著性差異。見表1。
　　 1.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨TRS％的影響
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠脛骨TRS％明顯增高。沙苑子組、狗脊組和陽性對(duì)照組較模型組大鼠脛骨TRS％明顯降低；肉蓯蓉組和韭菜子組較模型組無顯著性變化。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TRS％

6、較假手術(shù)組顯著增高；沙苑子組和陽性對(duì)照組較假手術(shù)組則無顯著性差異。見表2。
　　 1.3沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨TFS％和MAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR均明顯高于假手術(shù)組。與模型組相比,沙苑子組和陽性對(duì)照組大鼠脛骨TFS％和MAR顯著降低；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性差異。與假手術(shù)組相比,沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨TFS％均顯著增高；陽性對(duì)照組無明顯差異。狗

7、脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨MAR高于假手術(shù)組；沙苑子組和陽性對(duì)照組則無明顯差異。見表3。
　　 1.4沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨mAR和OSW的影響
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠脛骨mAR顯著升高。與模型組相比,沙苑子組和陽性對(duì)照組大鼠脛骨mAR明顯降低；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無明顯差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨mAR明顯高于假手術(shù)組；沙苑子組和陽性對(duì)照組較假手術(shù)組無顯著性差異。

8、
　　 模型組大鼠脛骨OSW較假手術(shù)組明顯升高。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨OSW較模型組和假手術(shù)組均無顯著性差異。陽性對(duì)照組大鼠脛骨OSW低于模型組,與假手術(shù)組無顯著性差異。見表4。
　　 2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKL蛋白及其mRNA表達(dá)的影響
　　 2.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANK

9、L蛋白表達(dá)的影響
　　 2.1.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白表達(dá)的影響
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白表達(dá)均明顯下調(diào)。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組和陽性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白表達(dá)明顯上調(diào)；肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組較假手術(shù)組明顯下調(diào)；沙苑予組和陽性對(duì)照組與假手術(shù)組相比,無明顯差異

10、。見表5。
　　 2.1.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)的影響
　　 模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組。沙苑子組、陽性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)較模型組顯著下調(diào)；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性變化。與假手術(shù)組相比,狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨成骨細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)上調(diào)；沙苑子組、狗脊組、

11、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)上調(diào)；沙苑子組大鼠脛骨成骨細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)較假手術(shù)組無顯著性差異。陽性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)與假手術(shù)相比,均無明顯差異。見表6。
　　 2.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKLmRNA表達(dá)的影響
　　 2.2.1沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞O

12、PGmRNA表達(dá)的影響
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPGmRNA表達(dá)均明顯下調(diào)。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組和陽性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPGmRNA表達(dá)明顯上調(diào)；肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著差異。狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組較假手術(shù)組明顯下調(diào)；沙苑子組和陽性對(duì)照組與假手術(shù)組相比,無明顯差異。見表7。
　　 2.2.2沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)

13、細(xì)胞RANKLmRNA表達(dá)的影響
　　 模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKLmRNA表達(dá)明顯高于假手術(shù)組。沙苑子組以及陽性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKLmRNA較模型組顯著下調(diào)；狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組無顯著性變化。與假手術(shù)組相比,狗脊組、肉蓯蓉組和韭菜子組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKLmRNA表達(dá)上調(diào)；沙苑子組、陽性對(duì)照組無明顯差異。見表8。
　　 3沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)

14、去卵巢大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量的影響
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠外周血清中IL-1含量顯著增高。與模型組相比,沙苑子組及陽性對(duì)照組大鼠外周血清中IL-1含量明顯降低；其它各給藥組則無顯著性變化。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中IL-1含量較假手術(shù)組均顯著升高；陽性對(duì)照組無明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中IL-6含量高于假手術(shù)組。與模型組相比,沙苑子組、狗脊組及陽性對(duì)照組大鼠外周

15、血清中IL-6含量較模型組明顯降低；肉蓯蓉組和韭菜子組則無顯著性差異。與假手術(shù)組相比,狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中IL-6含量明顯增高；沙苑子組和陽性對(duì)照組無明顯差異。見表9。
　　 4沙苑子、狗脊、肉蓯蓉和韭菜子對(duì)去卵巢大鼠外周血清中BGP、CT和PTH含量的影響
　　 模型組大鼠外周血清中BGP含量較假手術(shù)組明顯增高。沙苑子組和陽性對(duì)照組大鼠外周血清中BGP含量顯著低于模型組；其余各給藥組較模型組無顯著

16、性的變化。沙苑子組、狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組較假手術(shù)組均顯著升高；陽性對(duì)照組無明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中CT含量較假手術(shù)組明顯降低。與模型組相比,沙苑子組及陽性對(duì)照組CT含量明顯增加；其余各組藥組則無顯著性變化。與假手術(shù)組相比,狗脊組、肉蓯蓉組以及韭菜子組大鼠外周血清中CT含量顯著降低；沙苑子組和陽性對(duì)照組無明顯差異。
　　 與假手術(shù)組相比,模型組及各給藥組大鼠外周血清中PTH含量均無顯著性變化；各給藥組

17、大鼠外周血清中PTH含量較模型組亦無顯著性變化。見表10。
　　 假手術(shù)組與空白對(duì)照組相比,以上各項(xiàng)指標(biāo)均未發(fā)生顯著性變化,從而排除了手術(shù)本身對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。
　　 結(jié)論
　　 沙苑子和狗脊能在一定程度上使去卵巢所致的大鼠高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥恢復(fù)到一種骨形成大于骨吸收的相對(duì)平衡的狀態(tài),從而防止骨量的丟失,達(dá)到治療作用；而肉蓯蓉、韭菜子則無明顯的治療作用。沙苑子和狗脊的具體作用環(huán)節(jié)和作用特點(diǎn)如下:
　　 (1)