桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對去卵巢大鼠骨質疏松癥治療作用的機理探討.pdf

1、目的：
　　 采用骨組織形態(tài)計量學方法,探討具有滋補腎陰作用的單味中藥一桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對去卵巢所致骨質疏松癥大鼠的治療作用,并著重從破骨細胞分化調控因子和與骨代謝密切相關的激素和細胞因子的角度,初步揭示這四味中藥的作用機理及其特點,為中醫(yī)藥治療骨質疏松癥以及闡明“腎主骨”的機理提供進一步的實驗依據(jù)。方法
　　 選用雌性Wistar大鼠94只,隨機分為3組:空白對照組12只,假手術組12只,造模組70只。在術

2、后1個月,再將造模組大鼠隨機分為6組,即模型組、陽性對照組、墨旱蓮組和山藥組,每組12只；桑寄生組、五味子組,每組11只。
　　 在切除大鼠卵巢1個月后,桑寄生組、墨旱蓮組、五味子組和山藥組分別灌胃給予相應藥物的水煎劑,5.6ml/kg體重,1g生藥/ml,給藥劑量為5.6g生藥/kg,陽性對照組灌胃給予濃度為0.008mg/ml的己烯雌酚,5.6ml/kg體重,給藥劑量為0.0448mg/kg。以上給藥1d1次,連續(xù)6d,休息

3、1d后,再連續(xù)給藥6d,如此給藥3個月?？瞻讓φ战M、假手術組、模型組按同法灌服等體積的蒸餾水。
　　 各組大鼠于處死前15d和前3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重,以對骨進行熒光標記。給藥結束后,將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股動脈取血,用于檢測外周血清中IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH的含量。然后,再將各組大鼠迅速處死,取右側脛骨制作不脫鈣骨切片,用于骨組織形態(tài)計量學指標的檢測,取左側脛

4、骨制作冰凍切片,以檢測成骨細胞和骨髓基質細胞OPG和RANKL的蛋白表達。
　　 統(tǒng)計學處理方法:實驗結果皆以均數(shù)±標準差((x)±s表示,采用單因素方差分析(ANOVA)進行處理,組間兩兩比較,采用q檢驗。
　　 結果：
　　 1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨骨組織形態(tài)計量學指標的影響
　　 1.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TBV％的影響
　　 與假手術組相比

5、,模型組大鼠脛骨TBV％明顯降低。陽性對照組的TBV％顯著高于模型組,而與假手術組相比,無顯著性差異。桑寄生組、墨旱蓮組、五味子組和山藥組的TBV％均明顯高于模型組,而顯著低于假手術組。(見表1)
　　 1.2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TRS％的影響
　　 模型組大鼠脛骨TRS％顯著高于假手術組。陽性對照組的TRS％顯著低于模型組,而與假手術組比較,無顯著性差異。桑寄生組、墨早蓮組、五味子組和山藥組的

6、TRS％均顯著低于模型組,而明顯高于假手術組。(見表2)
　　 1.3桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TFS％、和MAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR較假手術組皆顯著增高。與模型組相比,陽性對照組的TFS％和MAR皆顯著降低；而與假手術組相比,無顯著性差異。桑寄生組、墨旱蓮組與五味子組的TFS％和MAR與模型組相比,均明顯降低；但明顯高于假手術組。山藥組TFS％和MAR顯著低于模型組；而與假手

7、術相比,無顯著性差異。(見表3)
　　 1.4桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OSW和mAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨OSW和mAR顯著高于假手術組。陽性對照組的OSW和mAR顯著低于模型組；而與假手術組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組和墨旱蓮組的OSW、mAR均無顯著性差異；而與假手術相比,桑寄生組的mAR明顯升高,墨旱蓮組均無顯著性差異。五味子組的mAR明顯低于模型組,與假手術組相比,OSW

8、、mAR皆無顯著性差異。山藥組的OSW、mAR顯著低于模型組；而與假手術組相比,均無顯著性差異。(見表4)。
　　 2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表達的影響
　　 2.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達的影響
　　 模型組大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度均明顯低于假手術組。陽性對照組OB和MSC OPG蛋白

9、陽性表達密度均明顯高于模型組；而與假手術組比較,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組、五味子組和山藥組OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度均明顯升高；而與假手術相比,MSC OPG陽性表達皆明顯降低,OB OPG的陽性表達則無顯著性差異。墨旱蓮OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度較模型組皆無顯著性差異；而與假手術相比,皆明顯降低。(見表5)
　　 2.2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表

10、達的影響
　　 模型組大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表達陽性密度均明顯高于假手術組。與模型組相比,陽性對照組OB和MSC RANKL蛋白陽性表達密度均明顯降低；而與假手術組相比,無顯著性差異。墨旱蓮組、山藥組OB和MSC RANKL與模型組相比皆顯著降低；而與假手術相比,無明顯差異。桑寄生組OB和MSC RANKL與模型組相比皆無顯著性差異；而與假手術相比,皆顯著增高。五味子組的OBRANKL與模型組比較明顯降低；而MSC

11、 RANKL無顯著性變化,且明顯高于假手術組。(見表6)
　　 3.桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH含量的影響。
　　 3.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清IL—1、IL-6含量的影響
　　 模型組大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量皆顯著高于假手術組。陽性對照組IL—1、IL-6含量顯著低于模型組；而與假手術組相比,無顯著性差異。與模

12、型組相比,桑寄生組IL—1含量顯著降低,IL-6含量則無顯著性差異；而與假手術組相比,皆明顯增高。墨旱蓮組IL-1含量顯著高于假手術組,而與模型組相比無顯著性差異；IL-6含量顯著低于模型組,而與假手術組相比無顯著性差異。五味子組IL-1、IL-6含量皆低于模型組；而與假手術組相比,IL-6含量明顯升高,但IL-1含量無顯著性差異。山藥組IL-1、IL-6含量皆顯著低于模型組,而與假手術組相比,IL-1顯著增高,但IL-6無顯著性差異。

13、(見表7)
　　 3.2.桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清中BGP、CT、PTH含量的影響。
　　 模型組大鼠外周血清BGP含量顯著高于假手術組。與模型組相比,陽性對照組BGP含量顯著降低；而與假手術組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生與墨旱蓮組BGP含量皆無顯著性差異；而較假手術組皆明顯增高。五味子組BGP含量明顯低于模型組；而與假手術相比,無顯著性差異。山藥組BGP含量顯著低于模型組而明顯高于

14、假手術組。
　　 與假手術組相比,模型組大鼠外周血清CT含量顯著降低。陽性對照組CT含量較模型組顯著增高；而與假手術組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組與墨旱蓮組CT含量皆顯著增高；而與假手術組相比,皆顯著性降低。五味子組CT較模型組明顯增高；而與假手術相比,無顯著性差異。與模型組相比,山藥組CT含量顯著性增高；而與假手術組相比,則無顯著性差異。
　　 模型組大鼠外周血清中PTH含量與假手術組相比,無顯著性差異；

15、各給藥組與模型組相比,皆無顯著性變化。(見表8)
　　 假手術組與空白對照組相比,上述所檢測指標均無顯著性差異,從而排除了手術因素對實驗的影響。
　　 結論：
　　 (1)切除大鼠卵巢可造成一種骨吸收大于骨形成的高轉換型骨質疏松癥模型,而桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥能在一定程度上對其產生抑制作用,并使之恢復到骨形成大于骨吸收的相對平衡狀態(tài),從而達到治療骨質疏松癥的作用。
　　 (2)桑寄生、墨旱蓮、五味子

16、和山藥能通過對破骨細胞分化調控因子和與骨代謝密切相關的細胞因子及激素中的某些環(huán)節(jié)產生調節(jié)作用,進而達到治療目的,并呈現(xiàn)出不同的作用特點,具體情況如下:
　　 山藥和五味子均能增強成骨細胞與骨髓基質細胞OPG表達而抑制RANKL表達:降低外周血中IL-1、IL-6的水平而提高CT的水平。桑寄生能增強OPG表達,降低IL-1水平和提高CT的水平,但對RANKL以及IL-6無影響。墨旱蓮可降低RANKL表達,降低IL-6水平和提高CT