桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥治療作用的機理探討.pdf

1、目的：
　　 采用骨組織形態(tài)計量學(xué)方法,探討具有滋補腎陰作用的單味中藥一桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠的治療作用,并著重從破骨細胞分化調(diào)控因子和與骨代謝密切相關(guān)的激素和細胞因子的角度,初步揭示這四味中藥的作用機理及其特點,為中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥以及闡明“腎主骨”的機理提供進一步的實驗依據(jù)。方法
　　 選用雌性Wistar大鼠94只,隨機分為3組:空白對照組12只,假手術(shù)組12只,造模組70只。在術(shù)

2、后1個月,再將造模組大鼠隨機分為6組,即模型組、陽性對照組、墨旱蓮組和山藥組,每組12只；桑寄生組、五味子組,每組11只。
　　 在切除大鼠卵巢1個月后,桑寄生組、墨旱蓮組、五味子組和山藥組分別灌胃給予相應(yīng)藥物的水煎劑,5.6ml/kg體重,1g生藥/ml,給藥劑量為5.6g生藥/kg,陽性對照組灌胃給予濃度為0.008mg/ml的己烯雌酚,5.6ml/kg體重,給藥劑量為0.0448mg/kg。以上給藥1d1次,連續(xù)6d,休息

3、1d后,再連續(xù)給藥6d,如此給藥3個月。空白對照組、假手術(shù)組、模型組按同法灌服等體積的蒸餾水。
　　 各組大鼠于處死前15d和前3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重,以對骨進行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后,將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股動脈取血,用于檢測外周血清中IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH的含量。然后,再將各組大鼠迅速處死,取右側(cè)脛骨制作不脫鈣骨切片,用于骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的檢測,取左側(cè)脛

4、骨制作冰凍切片,以檢測成骨細胞和骨髓基質(zhì)細胞OPG和RANKL的蛋白表達。
　　 統(tǒng)計學(xué)處理方法:實驗結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s表示,采用單因素方差分析(ANOVA)進行處理,組間兩兩比較,采用q檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的影響
　　 1.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TBV％的影響
　　 與假手術(shù)組相比

5、,模型組大鼠脛骨TBV％明顯降低。陽性對照組的TBV％顯著高于模型組,而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。桑寄生組、墨旱蓮組、五味子組和山藥組的TBV％均明顯高于模型組,而顯著低于假手術(shù)組。(見表1)
　　 1.2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TRS％的影響
　　 模型組大鼠脛骨TRS％顯著高于假手術(shù)組。陽性對照組的TRS％顯著低于模型組,而與假手術(shù)組比較,無顯著性差異。桑寄生組、墨早蓮組、五味子組和山藥組的

6、TRS％均顯著低于模型組,而明顯高于假手術(shù)組。(見表2)
　　 1.3桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨TFS％、和MAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR較假手術(shù)組皆顯著增高。與模型組相比,陽性對照組的TFS％和MAR皆顯著降低；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。桑寄生組、墨旱蓮組與五味子組的TFS％和MAR與模型組相比,均明顯降低；但明顯高于假手術(shù)組。山藥組TFS％和MAR顯著低于模型組；而與假手

7、術(shù)相比,無顯著性差異。(見表3)
　　 1.4桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OSW和mAR的影響
　　 模型組大鼠脛骨OSW和mAR顯著高于假手術(shù)組。陽性對照組的OSW和mAR顯著低于模型組；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組和墨旱蓮組的OSW、mAR均無顯著性差異；而與假手術(shù)相比,桑寄生組的mAR明顯升高,墨旱蓮組均無顯著性差異。五味子組的mAR明顯低于模型組,與假手術(shù)組相比,OSW

8、、mAR皆無顯著性差異。山藥組的OSW、mAR顯著低于模型組；而與假手術(shù)組相比,均無顯著性差異。(見表4)。
　　 2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表達的影響
　　 2.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達的影響
　　 模型組大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度均明顯低于假手術(shù)組。陽性對照組OB和MSC OPG蛋白

9、陽性表達密度均明顯高于模型組；而與假手術(shù)組比較,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組、五味子組和山藥組OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度均明顯升高；而與假手術(shù)相比,MSC OPG陽性表達皆明顯降低,OB OPG的陽性表達則無顯著性差異。墨旱蓮OB和MSC OPG蛋白表達陽性密度較模型組皆無顯著性差異；而與假手術(shù)相比,皆明顯降低。(見表5)
　　 2.2桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表

10、達的影響
　　 模型組大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表達陽性密度均明顯高于假手術(shù)組。與模型組相比,陽性對照組OB和MSC RANKL蛋白陽性表達密度均明顯降低；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。墨旱蓮組、山藥組OB和MSC RANKL與模型組相比皆顯著降低；而與假手術(shù)相比,無明顯差異。桑寄生組OB和MSC RANKL與模型組相比皆無顯著性差異；而與假手術(shù)相比,皆顯著增高。五味子組的OBRANKL與模型組比較明顯降低；而MSC

11、 RANKL無顯著性變化,且明顯高于假手術(shù)組。(見表6)
　　 3.桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清IL-1、IL-6、BGP、CT、PTH含量的影響。
　　 3.1桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清IL—1、IL-6含量的影響
　　 模型組大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量皆顯著高于假手術(shù)組。陽性對照組IL—1、IL-6含量顯著低于模型組；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。與模

12、型組相比,桑寄生組IL—1含量顯著降低,IL-6含量則無顯著性差異；而與假手術(shù)組相比,皆明顯增高。墨旱蓮組IL-1含量顯著高于假手術(shù)組,而與模型組相比無顯著性差異；IL-6含量顯著低于模型組,而與假手術(shù)組相比無顯著性差異。五味子組IL-1、IL-6含量皆低于模型組；而與假手術(shù)組相比,IL-6含量明顯升高,但IL-1含量無顯著性差異。山藥組IL-1、IL-6含量皆顯著低于模型組,而與假手術(shù)組相比,IL-1顯著增高,但IL-6無顯著性差異。

13、(見表7)
　　 3.2.桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥對卵巢切除大鼠外周血清中BGP、CT、PTH含量的影響。
　　 模型組大鼠外周血清BGP含量顯著高于假手術(shù)組。與模型組相比,陽性對照組BGP含量顯著降低；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生與墨旱蓮組BGP含量皆無顯著性差異；而較假手術(shù)組皆明顯增高。五味子組BGP含量明顯低于模型組；而與假手術(shù)相比,無顯著性差異。山藥組BGP含量顯著低于模型組而明顯高于

14、假手術(shù)組。
　　 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠外周血清CT含量顯著降低。陽性對照組CT含量較模型組顯著增高；而與假手術(shù)組相比,無顯著性差異。與模型組相比,桑寄生組與墨旱蓮組CT含量皆顯著增高；而與假手術(shù)組相比,皆顯著性降低。五味子組CT較模型組明顯增高；而與假手術(shù)相比,無顯著性差異。與模型組相比,山藥組CT含量顯著性增高；而與假手術(shù)組相比,則無顯著性差異。
　　 模型組大鼠外周血清中PTH含量與假手術(shù)組相比,無顯著性差異；

15、各給藥組與模型組相比,皆無顯著性變化。(見表8)
　　 假手術(shù)組與空白對照組相比,上述所檢測指標(biāo)均無顯著性差異,從而排除了手術(shù)因素對實驗的影響。
　　 結(jié)論：
　　 (1)切除大鼠卵巢可造成一種骨吸收大于骨形成的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥模型,而桑寄生、墨旱蓮、五味子和山藥能在一定程度上對其產(chǎn)生抑制作用,并使之恢復(fù)到骨形成大于骨吸收的相對平衡狀態(tài),從而達到治療骨質(zhì)疏松癥的作用。
　　 (2)桑寄生、墨旱蓮、五味子

16、和山藥能通過對破骨細胞分化調(diào)控因子和與骨代謝密切相關(guān)的細胞因子及激素中的某些環(huán)節(jié)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用,進而達到治療目的,并呈現(xiàn)出不同的作用特點,具體情況如下:
　　 山藥和五味子均能增強成骨細胞與骨髓基質(zhì)細胞OPG表達而抑制RANKL表達:降低外周血中IL-1、IL-6的水平而提高CT的水平。桑寄生能增強OPG表達,降低IL-1水平和提高CT的水平,但對RANKL以及IL-6無影響。墨旱蓮可降低RANKL表達,降低IL-6水平和提高CT