亮菌口服液液體深層發(fā)酵工藝的研究.pdf

1、亮菌學(xué)名假蜜環(huán)菌[Armillariella tabescens(Scop.ex Fr.)Sing]，是一種大型的藥食兼用型真菌。因菌絲體在暗處發(fā)出藍(lán)色的熒光，故稱之為亮菌。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，該菌對(duì)于肝炎、膽囊炎、腫瘤以及放化療引起的白細(xì)胞減少等炎癥有一定的療效，且還具有利肺、醒酒、益腸胃、強(qiáng)筋壯骨、疏風(fēng)活絡(luò)等保健功效。亮菌口服液是一款利用現(xiàn)代生物制藥工藝將亮菌經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵提取后制得的藥品，內(nèi)含有亮菌甲素、亮菌多糖以及氨基酸、多肽等多種生物活

2、性物質(zhì)。
　　目前國(guó)內(nèi)亮菌口服液及膠囊等相關(guān)制劑多采用固體發(fā)酵的生產(chǎn)工藝。以玉米粉、紅薯粉等為原料按一定比例混合制得固體培養(yǎng)基，滅菌接種，然后恒溫避光培養(yǎng)兩個(gè)月左右。此生產(chǎn)工藝優(yōu)點(diǎn)是發(fā)酵程度深，利于多種藥用有效成分的表達(dá)和積累;缺點(diǎn)是生產(chǎn)周期長(zhǎng)，污染的概率大，且一旦染菌則只能全部作廢，造成極大浪費(fèi)，且發(fā)酵終了培養(yǎng)基中殘?zhí)菨舛纫廊缓芨?，既影響產(chǎn)品的下游提取工作也造成了原料的浪費(fèi)。因此，固體發(fā)酵規(guī)模小、周期長(zhǎng)、產(chǎn)能低的缺點(diǎn)嚴(yán)重制約了企

3、業(yè)的產(chǎn)能和效益。合肥誠(chéng)志生物制藥有限公司在亮菌口服液的生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)隨著亮菌傳代次數(shù)的增加，菌種逐漸退化減產(chǎn)，降低了企業(yè)的產(chǎn)能和及藥品的效價(jià)。本實(shí)驗(yàn)室希望能夠找到一種延緩亮菌退化或使其復(fù)壯的簡(jiǎn)單易行的方法和技術(shù)。
　　針對(duì)合肥誠(chéng)志生物制藥有限公司提供的生產(chǎn)工藝和亮菌菌種，本實(shí)驗(yàn)室已開(kāi)展了一系列研究。具體如下:(1)亮菌液體種子制備及其應(yīng)用研究;(2)亮菌液體發(fā)酵初步研究;(3)亮菌固體發(fā)酵多糖提取工藝的優(yōu)化;(4)現(xiàn)行工藝亮菌固體

4、發(fā)酵條件改良。
　　在前期工作的基礎(chǔ)上，本文對(duì)亮菌液體種子深層發(fā)酵和靜置發(fā)酵兩種發(fā)酵工藝進(jìn)行初步研究，探究其取代傳統(tǒng)的亮菌固體發(fā)酵方式的可行性，為亮菌口服液的液體種子發(fā)酵生產(chǎn)工藝技術(shù)提供參考;以及對(duì)亮菌菌種復(fù)壯方法進(jìn)行初步的研究。
　　本論文主要內(nèi)容:(1)亮菌液體種子深層發(fā)酵工藝的探究;(2)亮菌液體種子靜置發(fā)酵工藝的探究;(3)發(fā)酵液組分的剖析;(4)退化亮菌菌種復(fù)壯的初步研究。研究結(jié)果為:
　　(1)亮菌液體種子

5、深層發(fā)酵工藝的研究結(jié)果:通過(guò)14 L小型發(fā)酵罐液體深層發(fā)酵對(duì)亮菌液態(tài)種子發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化探究。采用28℃，通氣量為1∶1 v/v·m，200 r/min，培養(yǎng)一周，得亮菌干重16.55 g/L，其中菌絲體中亮菌多糖含量為5.42％，蛋白含量為1.75％。結(jié)果表明，通過(guò)發(fā)酵罐液體種子深層發(fā)酵方式所獲得的亮菌生物量高，且周期短，但缺點(diǎn)是發(fā)酵程度低，發(fā)酵液顏色不深，無(wú)法像固體發(fā)酵那樣產(chǎn)生菌絲體分泌大量棕褐色液體的現(xiàn)象。
　　(2)亮菌液

6、體種子靜置發(fā)酵工藝的研究結(jié)果:液體靜置發(fā)酵采用500ml三角瓶，28℃，150r/min，搖瓶3天后靜置發(fā)酵14天，亮菌干重為10.69g/L，發(fā)酵液中亮菌多糖含量為1.016g/L，蛋白含量為0.320g/L。觀察發(fā)現(xiàn)每一個(gè)三角瓶都能分泌大量棕褐色胞外液且形成粗壯多分支的菌索，相對(duì)于傳統(tǒng)的固體發(fā)酵，這大大縮短了發(fā)酵周期，且發(fā)酵液質(zhì)量高，雜質(zhì)少，提取濃縮簡(jiǎn)單易行，亮菌多糖等活性成分指標(biāo)均優(yōu)于傳統(tǒng)的固體發(fā)酵。
　　(3)發(fā)酵液組分的

7、分析研究結(jié)果:雖然靜置發(fā)酵得到的亮菌生物量不及發(fā)酵罐液體深層發(fā)酵，但后者的發(fā)酵程度深，能夠產(chǎn)生菌絲體分泌大量棕褐色胞外液的現(xiàn)象，培養(yǎng)基利用率高，優(yōu)于傳統(tǒng)的固體發(fā)酵。對(duì)液體靜置發(fā)酵工藝進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵液中亮菌甲素含量可達(dá)3.118mg/L。
　　(4)亮菌菌種復(fù)壯的初步研究結(jié)果:通過(guò)在普通的培養(yǎng)亮菌的PDA固體培養(yǎng)基中分別添加不同濃度柳木屑提取液、稻草提取液和不同種類(lèi)的微量元素，探索其對(duì)亮菌菌種的復(fù)壯效果高低，初步研究發(fā)現(xiàn)亮菌在