姬松茸液體深層發(fā)酵的研究.pdf

1、目的:本文在對(duì)姬松茸母種培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)的考察姬松茸液體培養(yǎng)條件如pH、溫度、裝液量、接種量對(duì)姬松茸液體發(fā)酵的影響,著重考察種齡對(duì)液體發(fā)酵過(guò)程中的各種產(chǎn)物的影響并初步研究胞外C<,x>酶部分酶學(xué)特性.探索酶法提取姬松茸胞內(nèi)多糖的最佳提取工藝,并對(duì)得到的姬松茸胞內(nèi)多糖和胞外多糖進(jìn)行分離純化.方法在對(duì)姬松茸母種培養(yǎng)基篩選方面,首先對(duì)姬松茸母種生長(zhǎng)的生理?xiàng)l件進(jìn)行研究,然后通過(guò)菌絲體生長(zhǎng)狀況選擇出最適的碳氮源,以及最適的碳

2、氮源濃度,最后通過(guò)多種條件的相互作用選擇出姬松茸母種的最適培養(yǎng)基.在對(duì)液體深層發(fā)酵條件礬究方面,運(yùn)用干燥法測(cè)定菌絲體干重,3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖,苯酚-硫酸法測(cè)定總糖,首先進(jìn)行碳、氮源以及無(wú)機(jī)鹽試驗(yàn),確定發(fā)酵培養(yǎng)基,然后確定了姬松茸液體培養(yǎng)條件.通過(guò)測(cè)定菌絲體干重、還原糖、胞內(nèi)多糖、胞外多糖、pH值以及胞外纖維素酶的變化,考察液體種子種齡對(duì)姬松茸液體培養(yǎng)的產(chǎn)物的影響.采用復(fù)合酶法提取姬松茸胞內(nèi)多糖,選用sevage試劑對(duì)得到的

3、胞內(nèi)多糖和胞外多糖去雜蛋白,采用Sephadex G-200凝膠柱層析對(duì)多糖進(jìn)行分離純化.結(jié)果姬松茸母種在26℃,pH自然,加富PDA培養(yǎng)基上菌絲呈白色絨毛狀,長(zhǎng)勢(shì)旺盛,爬壁能力強(qiáng).姬松茸在由麩皮5％,蔗糖1％,葡萄糖1％,蛋白胨0.2％,KH<,2>PO<,4>0.2％,MgSO<,4>.7H<,2>O 0.1％組成的液體發(fā)酵培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)條件分別為溫度25℃,初始pH6.0,裝液量80ml/250ml,接種量10％達(dá)到各自菌絲體干

4、重最大值.種齡為4天時(shí)接種,深層發(fā)酵產(chǎn)生的生物量、胞內(nèi)多糖和胞外多糖均高于所選種齡為6天和8天時(shí)接種;種齡為8天時(shí)接種生成的胞外外切β-1,4-葡萄糖苷酶(C<,1>酶)與內(nèi)切β-1,4-葡萄糖苷酶(C<,x>酶)高于種齡為4天和6天時(shí)接種.胞外C<,x>酶酶反應(yīng)最適作用時(shí)間為30min,最適作用溫度為50℃,最適pH為5.0.復(fù)合酶法提取姬松茸胞內(nèi)多糖最佳酶解條件為纖維素酶0.5％,木瓜蛋白酶1.0％,果膠酶1.0％,溫度45℃,pH

5、4.5,酶解時(shí)間1.5h.經(jīng)凝膠柱分離純化,胞內(nèi)多糖得到分子量為40513和91033兩種組分,胞外多糖得到分子量為為93089、45782和36795三種組分.結(jié)論在26℃,pH自然條件下,姬松茸母種適合在加富PDA培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng).以5％麩皮為主的液體發(fā)酵培養(yǎng)基適合姬松茸液體深層發(fā)酵培養(yǎng),試驗(yàn)中選擇培養(yǎng)條件為溫度25℃,初始pH6.0,裝液量50ml/250ml,接種量10％.姬松茸液體深層發(fā)酵的產(chǎn)物與液體菌種的種齡有關(guān),產(chǎn)生的胞外