HPLC-MS-MS檢測牛乳中類固醇激素及乳的安全性分析.pdf

1、目前中國乳業(yè)及乳制品加工業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量正面臨著重大的挑戰(zhàn)。根據(jù)流行病學(xué)研究判斷，公眾對于牛奶中的類固醇激素產(chǎn)生越來越多的關(guān)注，乳制品與乳腺、子宮癌、卵巢癌、男性生殖障礙及青少年肥胖等疾病的發(fā)生有密切關(guān)系。類固醇激素被認(rèn)為是導(dǎo)致這些不利健康影響的可能原因。由于分析方法和樣品制備方法的不同，很難得到甾體激素的準(zhǔn)確度結(jié)果，并且研究中的樣本數(shù)和牛的生理因素也可以影響整個牛奶樣品中類固醇激素含量的重要因素。因此建立行之有效的控制和檢測技術(shù)，對于乳制

2、品質(zhì)量安全事件的屢屢發(fā)生具有深遠意義。本實驗建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛初乳及常乳中多種類固醇激素的檢測方法。
　　文章建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）測定牛初乳及常乳中22種類固醇激素的檢測方法。樣品依次經(jīng)過甲醇提取、HLB固相萃取小柱凈化和濃縮后，再經(jīng)液相色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18（2.1×150mm，5μm）分離。在液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）分析過程中以保留時間及目標(biāo)物質(zhì)的離

3、子對（母離子和兩個子離子）信息進行比較，以母離子和響應(yīng)值高的子離子進行定量分析。該方法的最低檢出限（S/N≥3）為0.10~1.20μg/kg。添加水平為100μg/kg和200μg/kg時，22種類固醇激素的平均加標(biāo)回收率為82.6~95.3％，方法的變異系數(shù)（CV）為4.2~11.3%且均處于可接受范圍內(nèi)（CV<15%）。各激素的線性范圍廣（2.5~500μg/L），均有良好的線性關(guān)系，R值處于0.9943和0.9998之間。本方法

4、具有簡單、準(zhǔn)確、快速、靈敏度高等優(yōu)點，能滿足實際樣品檢測需求。
　　用已建立好的檢測方法對四川新希望示范牧場的樣品進行了檢測，本研究在四川新希望乳牛養(yǎng)殖示范牧場內(nèi)隨機選取10頭健康的懷孕荷斯坦乳牛，收集10頭荷斯坦乳牛產(chǎn)后分泌的1~7d的乳汁，并隨機選取無抗生素使用且處在不同泌乳時期（15~320d）的荷斯坦奶牛各30頭，采用HPLC-MS/MS方法分析牛初乳和常乳中類固醇激素組分及含量，結(jié)果表明，常乳中所含有的激素含量甚少，全部