HPLC-MS-MS檢測(cè)血中BPDE-dG加合物方法的建立及人群生物監(jiān)測(cè).pdf

1、BPDE-DNA加合物是多環(huán)芳烴(PAHs)在體內(nèi)活化代謝的產(chǎn)物，在化學(xué)致癌過程中處于核心地位。若體內(nèi)形成的BPDE-DNA加合物不能被機(jī)體及時(shí)修復(fù)，將引起基因突變，導(dǎo)致遺傳的不穩(wěn)定，最終誘發(fā)癌癥。因此，BPDE-DNA加合物作為一種重要的暴露生物標(biāo)志物，對(duì)研究環(huán)境和職業(yè) PAHs暴露的致癌機(jī)制以及健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)都具有十分重要的意義。
　　常用的DNA加合物檢測(cè)方法包括：32P-后標(biāo)記法、免疫分析法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。其中，HPLC

2、-MS/MS方法具有高通量、高靈敏度、高特異性的特點(diǎn)，可以同時(shí)定性定量檢測(cè)微量的BPDE-DNA加合物，適用于評(píng)價(jià)環(huán)境和職業(yè)暴露 PAHs的健康風(fēng)險(xiǎn)。因此，建立和優(yōu)化高特異性、高靈敏度、高通量的HPLC-MS/MS檢測(cè) BPDE-DNA加合物的方法，能夠?yàn)殚_展PAHs環(huán)境和職業(yè)暴露的生物監(jiān)測(cè)以及健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供方法學(xué)支持。
　　本文采用水飽和正丁醇的萃取方法，通過優(yōu)化 HPLC-MS/MS建立了檢測(cè)臍帶血中BPDE-DNA加合物的

3、方法。該方法利用[15N5]BPDE-dG作為內(nèi)標(biāo)，采用化學(xué)合成的BPDE-dG作為外標(biāo)，定性和定量分析臍帶血中BPDE-dG加合物。該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，適用于大量人群樣本的生物監(jiān)測(cè)和分子流行病學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容主要包括以下4個(gè)方面：
　　1、標(biāo)準(zhǔn)品的合成、純化和定量：分別合成 BPDE-dG加合物和[15N5]BPDE-dG加合物作為外標(biāo)和內(nèi)標(biāo)。采用HPLC純化合成的標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度計(jì)對(duì)純化后的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定量。

4、
　　2、臍帶血前處理方法和HPLC-MS/MS條件的建立和優(yōu)化：采用脫氧核糖核酸酶、磷酸二酯酶和堿性磷酸酶酶解DN A，結(jié)合液液萃取方法，富集臍帶血中 BPDE-dG加合物。采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)方法，建立檢測(cè)臍帶血中BPDE-DNA加合物的方法。該方法與現(xiàn)有方法比較，DNA用量少，通常需要10μg DNA，最低可以檢測(cè)5μg DNA，靈敏度較高，該方法檢測(cè)限為：每109個(gè)dG中可檢測(cè)出2.7個(gè)BPDE-dG加合物。該方法具有

5、簡(jiǎn)便易行、回收率高的特點(diǎn)，回收率為97％~112%。
　　3、該方法用于孕婦臍帶血中BPDE-dG加合物的檢測(cè)：42個(gè)出生缺陷新生兒母親臍帶血和42個(gè)隨機(jī)選擇的正常新生兒母親臍帶血來自淮河流域重點(diǎn)地區(qū)出生缺陷研究隊(duì)列。
　　研究結(jié)果顯示：
　?。?）LC-MS/MS檢測(cè)方法應(yīng)用于檢測(cè)臍帶血中BP DE-dG加合物，該方法檢測(cè)精度、重現(xiàn)性均滿足檢測(cè)要求，與現(xiàn)有方法比較，該方法僅需要較少量生物樣品，一般需要10μg DNA

6、，最低可以檢測(cè)5μg DNA，適用于大量人群的生物監(jiān)測(cè)和分子流行病學(xué)研究。（2）將出生缺陷新生兒和正常新生兒母親臍帶血進(jìn)行分層，按照孕婦居住鄉(xiāng)鎮(zhèn)在污染高聚集區(qū)（一般距離河較近）和污染低聚集區(qū)（一般距離河較遠(yuǎn)）進(jìn)行分層。臍帶血中∑PAHs和BaP暴露水平病例組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6種∑PAHs和BaP暴露水平和及BPDE-dG加合物含量均高于對(duì)照組，在污染高聚集區(qū)∑PAHs和BaP暴露水平病例組和對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（3）臍