酵母葡聚糖生產(chǎn)工藝及生物活性研究.pdf

1、啤酒酵母營養(yǎng)豐富,其β-(1,3)-D-葡聚糖含量約為30％,是具有免疫調(diào)節(jié)、抗菌抗癌活性的多糖,利用啤酒酵母生產(chǎn)酵母葡聚糖,不但可以提高經(jīng)濟(jì)和社會效益,還可以降低其對環(huán)境的污染。本文以啤酒酵母為原料,通過水提、堿提、酶解法提取,利用微濾膜、超濾膜純化最后經(jīng)噴霧干燥得到天然水溶性酵母β-葡聚糖。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　首先,利用啤酒酵母粉為原料,熱水提取甘露聚糖。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)研究確定最佳提取條件為:水料比40:1、時間

2、1.5h、溫度100℃,提取2次,甘露聚糖得率為16.35％,含量為53.78％。
　　其次,水提后的殘渣用2.5mol/L的NaOH提取酵母葡聚糖。在70℃條件下,按30:1、10:1的料液比分別提取1次,每次提取1h,離心得沉淀,水洗沉淀得非水溶性酵母β-葡聚糖,得率為17.65％,含量73.11％。
　　再次,堿提取的離心清液,用冰醋酸調(diào)pH,利用木瓜蛋白酶酶解去除部分蛋白質(zhì)。最佳酶解條件為:蛋白酶添加量為總體積的2.

3、5‰,pH值7.0,溫度50-55℃,酶解時間8h,酶解液經(jīng)微濾、超濾分離濃縮,噴霧干燥得水溶性酵母β-葡聚糖粗品,得率為8.72％,含量72.02％。
　　根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計8因素4水平正交實(shí)驗(yàn),得到最佳提取條件:熱水料液比1:40;熱水提取時間1.5 h;熱堿濃度2.5 mol/L;熱堿提取時間0.5 h;熱堿溫度65℃;酶濃度2.5‰,酶解時間8 h;酶解溫度55℃。
　　水溶性酵母β-葡聚糖的純化精制。將粗品復(fù)

4、溶、膜濾,經(jīng)大孔吸附樹脂柱進(jìn)一步脫色脫蛋白,冷凍干燥得水溶性酵母β-葡聚糖精品,得率為6.52％,含量為91.35％。精致后的酵母β-葡聚糖經(jīng)薄層層析分析表明,其主要成分為葡萄糖,其紅外吸收光譜譜圖中,在889-cm處可見明顯的吸收峰,凝膠色譜法測定其分子量為50-180Kda。
　　建立了天然水溶性酵母β-葡聚糖提取分離純化工藝,建立了葡聚糖的鑒別方法和HPLC含量測定方法,并通過中試車間驗(yàn)證。上述工藝過程經(jīng)2000L提取罐放大

5、,證明工藝參數(shù)可靠,工藝過程穩(wěn)定,所得水溶性酵母β-葡聚糖產(chǎn)品符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。
　　生物活性研究方面:
　　抑菌圈法試驗(yàn)表明,水溶性酵母β-葡聚糖對細(xì)菌有很明顯的抑制作用,對酵母菌和霉菌抑制作用不明顯;對幾種微生物的抑制作用大小依次為金黃色葡萄球菌>枯草芽孢桿菌>沙門氏菌>大腸桿菌。
　　碳粒廓清試驗(yàn)表明,水溶性酵母葡聚糖樣品0.1g/Kg、0.4g/Kg、1.0g/Kg劑量灌胃給藥,1.0g/Kg劑量組小鼠的巨噬細(xì)

6、胞吞噬指數(shù),與對照組相比具有顯著差異(p<0.05)。三個劑量組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),與對照組相比,均具有顯著差異(p<0.05)。說明其具有增強(qiáng)細(xì)胞免疫力的作用。
　　溶血素抗體生成試驗(yàn)表明,水溶性酵母葡聚糖樣品0.1g/Kg、0.4g/Kg、1.0g/Kg劑量灌胃給藥,三個劑量組小鼠血清的吸光度值,與對照組相比,均具有顯著差異(p<0.05)。說明水溶性酵母葡聚糖具有增強(qiáng)體液免疫的的功能。
　　遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果表明,