β-葡聚糖酶在畢赤酵母和解脂耶氏酵母中的表達(dá)及酶活的測(cè)定.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：通過(guò)在畢赤酵母和解脂耶氏酵母中對(duì)β-葡聚糖酶進(jìn)行表達(dá)，找到表達(dá)酶活高的菌株，以及比較在畢赤酵母和解脂耶氏酵母兩種系統(tǒng)中表達(dá)的不同。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用基因合成的方法合成來(lái)源于Bacillus licheniformis和Fibrobacter succinogenes兩種來(lái)源的畢赤酵母密碼子偏愛(ài)性的β-葡聚糖酶基因，分別將兩種p.葡聚糖酶基因克隆到畢赤酵母載體pHBM905A和解脂耶氏酵母載體pINA1296上，通過(guò)

2、對(duì)兩種載體的鑒定得到重組畢赤酵母載體和解脂耶氏酵母載體。將重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入畢赤酵母菌GS115和解脂耶氏酵母菌Polg，通過(guò)功能篩選找到酶活高的畢赤酵母菌株和解脂耶氏酵母菌株。對(duì)重組畢赤酵母和重組解脂耶氏酵母分別進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，經(jīng)SDS-PAGE來(lái)檢測(cè)β-葡聚糖酶在畢赤酵母和解脂耶氏酵母中的表達(dá)情況。用酶活檢測(cè)來(lái)確定β-葡聚糖酶在畢赤酵母和解脂耶氏酵母中酶活和誘導(dǎo)時(shí)間的關(guān)系，分別用三種底物來(lái)測(cè)定β-葡聚糖酶在畢赤酵母和解脂耶氏酵母中的酶活

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