基質(zhì)中木聚糖酶活力測定方法的研究.pdf

1、木聚糖是植物半纖維素的重要成分，是自然界中僅次于纖維素含量第二豐富的可再生資源。木聚糖酶是一類降解木聚糖分子中β-1，4木糖苷鍵的酶系，可將木聚糖水解為低聚木糖、木寡糖、木二糖、以及少量阿拉伯糖和木糖。因此木聚糖酶被廣泛應(yīng)用于生物能源、食品、飼料、制藥、制漿、造紙、紡織等行業(yè)中，已成為國內(nèi)外眾多學(xué)者的研究熱點。衡量酶生物活性的重要標(biāo)準(zhǔn)是酶活力，目前常用的活力測定方法是DNS法，該法雖然操作簡單、精密度高，但靈敏度低，無法檢測酶反應(yīng)初速度

2、，無法檢測微量木聚糖酶活力。本文建立了3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法已將其應(yīng)用于木聚糖酶活力的測定，但將其應(yīng)用于基質(zhì)中木聚糖酶活力的測定是首次，因此本文首先對MBTH法測木聚糖酶活力進行了優(yōu)化并與DNS法進行了比較。并將其應(yīng)用于飼料中木聚糖酶活力的測定，聯(lián)合高通量分析手段，可一次性準(zhǔn)確快速的處理大量樣品，因此該法將會在各個領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。本論文主要包括以下研究內(nèi)容：
　　1.建立了MBTH法測酶解產(chǎn)物還原端基的新方法

3、
　　首先對還原糖測定條件進行了參數(shù)優(yōu)化，其次建立還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線以及與DNS法進行比較，最后研究了高濃度木糖含量的測定方法，并進行了方法驗證，結(jié)果表明：MBTH法靈敏度高于DNS法10倍以上，且精密度、準(zhǔn)確度都較高；在還原糖濃度較高的情況下，可以進行適當(dāng)稀釋后，對照稀釋后的還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算還原糖的量。
　　2.對MBTH法與DNS法測木聚糖酶活力進行了比較
　　對MBTH法測木聚糖酶活力進行了優(yōu)化并與DNS法進行比較

4、。首先對底物、酶解溫度進行了研究，其次與DNS法在酶解動力學(xué)及酶濃度對反應(yīng)速率的影響進行了比較，最后在檢測限、靈敏度等方面進行了方法驗證。結(jié)果表明：木聚糖酶與樺木木聚糖親和力較大，最適底物濃度為4 mg/mL，酶解溫度為30℃，當(dāng)酶含量較少時可選37℃；MBTH法(DL=0.0090μg/mL)在靈敏度和準(zhǔn)確度方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于DNS法(DL=0.107μg/mL)。因此，MBTH法特別適合于木聚糖酶活力的定量測定。
　　3.MBTH

5、法在飼料基質(zhì)中酶活力測定的應(yīng)用研究
　　對MBTH法在飼料木聚糖酶活力測定進行了研究。首先對飼料中酶的提取方法進行了研究，其次對酶解溫度進行優(yōu)化并建立了飼料中的酶濃度曲線，最后MBTH法測幾種飼料樣品酶活力并進行方法驗證。結(jié)果表明：飼料酶的最佳提取方式為緩沖液低溫條件下(4℃)電磁攪拌溶解，離心取上清液；飼料中酶活力的最適酶解溫度為37℃；MBTH法可準(zhǔn)確測定飼料中微量木聚糖酶活力，且具備良好的準(zhǔn)確度靈敏度和精密度。
　　4

6、.高通量分析在飼料酶活力測定中的應(yīng)用研究
　　運用MBTH法聯(lián)合高通量分析手段測定飼料中木聚糖酶活力。首先對MBTH法在微孔板體系中的運用進行了方法優(yōu)化，確立了各項酶解參數(shù)；其次MBTH法與微孔板測定手段相結(jié)合測定飼料中的酶活力；最后進行方法驗證。結(jié)果表明：高通量分析法中MBTH法的酶解參數(shù)與試管法稍有差別，酶濃度曲線的斜率(6.14)和試管法(6.11)基本一致；高通量分析法在測定飼料酶活力時有較低的檢測限(0.190μg/mL