葡聚糖酶定量測(cè)定葡聚糖的研究及其在制糖工業(yè)中應(yīng)用.pdf

1、本文以尋求一種重復(fù)穩(wěn)定性好、樣品預(yù)處理簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的檢測(cè)制糖中葡聚糖的方法為前提,對(duì)酶解法進(jìn)行了初步的研究,并考查了α-葡聚糖酶在制糖工業(yè)中的應(yīng)用效果。從Menland公司、Sigma公司和本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶中,篩選出對(duì)不同聚合度、不同濃度的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液具有穩(wěn)定分解率的α-葡聚糖酶。實(shí)驗(yàn)證明,本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶雖然酶解能力比其它兩種不同來源酶稍弱,但其分解率卻是最穩(wěn)定的。同時(shí)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶進(jìn)行

2、了酶學(xué)性質(zhì)研究,試驗(yàn)主要分析了溫度、pH、底物濃度、不同濃度的金屬離子對(duì)酶活力的影響,推算出米氏常數(shù)Km和最大反應(yīng)速度Vm值。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶最適酶解溫度、pH、底物濃度分別為55℃、5.0、2.0％；不同濃度的金屬離子對(duì)α-葡聚糖酶激活、抑制作用各不相同,沒有一定的規(guī)律性；本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶米氏常數(shù)Km=12.00mg/mL,最大反應(yīng)速度Vm=67.11ug/min*mL。對(duì)本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡

3、聚糖酶進(jìn)行了酶解工藝研究,即進(jìn)行了α-葡聚糖酶最適酶解時(shí)間和酶解率的確定,結(jié)果表明,葡聚糖酶對(duì)底物濃度為0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 mg/mL的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液最適反應(yīng)時(shí)間分別為20、60、90、120、180min；本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵產(chǎn)生的α-葡聚糖酶對(duì)葡聚糖有特定的分解率,分解率為56.0％,對(duì)葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液的回收率在100±5％之間；同時(shí)用酶解法與葡聚糖含量常規(guī)測(cè)定法進(jìn)行比較,結(jié)果表明,酶解法與Roberts-銅法及Haze-

4、酒精沉淀法測(cè)定葡聚糖含量正負(fù)偏差均不超過10％,而與抗體法則表現(xiàn)出很大的偏差；初步分析了各種偏差產(chǎn)生的因?yàn)椤Ｔ囼?yàn)最后進(jìn)行了葡聚糖酶在制糖工業(yè)中的應(yīng)用探索。在制糖各階段樣品中加入α-葡聚糖酶后,進(jìn)行樣品各性能對(duì)比分析試驗(yàn),從多方面考查葡聚糖酶的加入對(duì)樣品性能的改變程度,如:色值、旋光度、錘度、沉降速度等。結(jié)果表明,甘蔗汁在加入α-葡聚糖酶后,pH值和錘度都有一定程度的降低、黏度降低率在15.0±5.0％范圍內(nèi)、除濁率高達(dá)87.2％、葡聚糖

5、去除率均大于90％；而簡(jiǎn)純度則出現(xiàn)了不穩(wěn)定的變化,葡聚糖含量高的樣品,簡(jiǎn)純度在加入α-葡聚糖酶后變大,葡聚糖含量低的樣品,則變化不明顯,甚至減小。石灰法清凈試驗(yàn)表明,在蔗汁中加入α-葡聚糖酶,蔗汁的沉降速度明顯變快,沉降高度也相對(duì)較高,而且蔗汁沉降后顏色較澄清、透明,視覺效果好。糖漿實(shí)驗(yàn)表明,糖漿中葡聚糖含量變化不與培養(yǎng)時(shí)間成正比,黏度則與葡聚糖含量保持一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。在糖漿中加入α-葡聚糖酶后,葡聚糖的降解率小于其在甘蔗汁中的降解率。