一株枯草芽孢桿菌抗植物病原真菌活性物質(zhì)的研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)被認為是一種具有潛在的能有效抑制植物病原真菌并促進植物生長發(fā)育作用的有益菌種。目前，已陸續(xù)從不同的枯草芽孢桿菌菌株中分離得到具有抑制植物病原真菌生長的脂肽類物質(zhì)，包括表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和芬枯草菌素(Fengycin)。本實驗室分離得到兩株芽孢桿菌RJ-1和RJ-2。通過傳統(tǒng)的形態(tài)、生理生化鑒定，發(fā)現(xiàn)它們與枯草芽孢桿菌特征相符?；?6SrDNA的進

2、一步系統(tǒng)進化分析結(jié)果表明，RJ-1和RJ-2均與枯草芽孢桿菌有高度同源性，故鑒定為枯草芽孢桿菌。在RJ-1和RJ-2與植物病原真菌尖孢鐮刀菌黃瓜專屬型(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum,F.o.c)的平板對峙實驗中，RJ-1沒有任何的抑菌作用，而RJ-2則表現(xiàn)出強抑菌效果。進一步比較RJ-1和RJ-2搖瓶發(fā)酵胞外代謝物粗提液的HPLC譜圖，發(fā)現(xiàn)RJ-2具有RJ-1所沒有的特征代謝產(chǎn)物。使用LC-MS液相

3、質(zhì)譜聯(lián)用儀選擇性地對RJ-2的這部分特征產(chǎn)物進行質(zhì)譜分析，推測主要成分的分子量可能是1477.0、1489.1和1505.1，通過肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)初步鑒定為C17-18FengycinA或者C16-18FengycinB。為了更進一步地確定上述結(jié)果，本文使用了高精度的生物質(zhì)譜——MALDI-TOFMS對RJ-2粗提液在枯草芽孢桿菌分泌的脂肽類物質(zhì)所處的900～1600Da分子量區(qū)間內(nèi)進行了質(zhì)譜分析，從而發(fā)現(xiàn)RJ-2產(chǎn)生的特征代謝物包括一

4、組分子量相差14Da(CH2)，含量成階梯分布的代謝同系物，分子量依次為1462.8、1476.8、1490.8、1504.8和1518.8。通過肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)鑒定為C14-18FengycinB，其中C17FengycinB含量最高，為其主要成分。此外，還發(fā)現(xiàn)另一組分子量相差14Da(CH2)的碳鏈同系物系列，含量同樣呈現(xiàn)階梯分布，分子量依次為1432.8、1446.8、1460.8、1474.8和1488.8，與C14-18Fen