L-乳酸高產(chǎn)菌株的誘變選育.pdf

1、本文以干酪乳桿菌CICC6028為出發(fā)菌株，首先進(jìn)行培養(yǎng)基及培養(yǎng)工藝優(yōu)化。結(jié)果顯示，種子培養(yǎng)24h，接種量10％，pH6.8，培養(yǎng)溫度34℃，發(fā)酵培養(yǎng)基成分（g/L）為：葡萄糖140，牛肉膏9，酵母膏4.5，蛋白胨9，無水乙酸鈉5，MgSO4·7H2O0.2，MnSO40.125，吐溫-801mL，CaCO350時乳酸產(chǎn)量達(dá)到90.7g/L。對試驗菌株采用紫外線、微波、硫酸二乙酯、低能離子束等誘變劑進(jìn)行反復(fù)誘變處理得到各誘變劑的最佳誘變

2、參數(shù)分別為：紫外燈功率15W，樣品距燈管距離15cm，處理15s；微波功率480W，采用間歇誘變方式共處理40s；硫酸二乙酯濃度1%，處理30min；離子束能量10Kev，劑量50×2.6×1013。采用上述最佳的誘變參數(shù)對試驗菌株進(jìn)行反復(fù)誘變選育，篩選出一株高產(chǎn)突變菌株 NE-19，其乳酸產(chǎn)量達(dá)到121.3g/L，比出發(fā)菌株提高了33.7%。通過研究不同溫度對突變株L-乳酸產(chǎn)量的影響時發(fā)現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)溫度為40℃時乳酸產(chǎn)量最高，說明突變株

3、最佳的發(fā)酵溫度為40℃。對高產(chǎn)突變菌株的代謝產(chǎn)物進(jìn)行高效液相分析發(fā)現(xiàn)，突變株的發(fā)酵產(chǎn)物為乳酸，幾乎沒有其他副產(chǎn)物產(chǎn)生。通過對突變株的發(fā)酵培養(yǎng)基中碳氮源進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化，最終得到最佳的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為（g/L）：葡萄糖153.7、蛋白胨17.3、牛肉膏15.9、酵母膏8.3、無水乙酸鈉5，MgSO4·7H2O0.2，MnSO40.125，吐溫-801mL，CaCO350，pH6.8。采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基進(jìn)行驗證試驗，結(jié)果顯示突變株的乳酸產(chǎn)量平