2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、叉枝松藻,又名叉開松藻,屬于綠藻門、松藻目、松藻科、松藻屬,多生長在中、低潮帶的巖石上或石沼中。本論文以采自我國黃海海域的叉枝松藻為研究對象,采用各種色譜分離技術,獲得叉枝松藻的純品多糖,采用化學法、色譜法、波譜法對其組成和結構進行研究,并對結構新穎的叉枝松藻多糖進行降解研究,建立可控酸降解方法制備低分子量多糖及寡糖,通過核磁共振技術和質譜法,對獲得的低分子量多糖及寡糖進行結構研究,并測定了叉枝松藻多糖及各種低分子量多糖的抗凝血活性。研

2、究結果如下:
  1.以叉枝松藻為原料,依次采用冷水、熱水和0.5mol/L NaOH溶液提取多糖,分別得到3個多糖組分CP、HP和AP,相對于干燥藻體的得率分別為10.72%、8.41%和1.54%,并對其理化性質和單糖組成進行分析。結果表明,CP、HP和AP均為硫酸化多糖,總糖含量分別為66.7%、65.4%和44.3%;硫酸基含量分別為25.6%、11.8%和28.2%; AP的蛋白含量最高為20.4%。3種粗多糖的主要單糖

3、組成均為半乳糖,另外還含有數(shù)量不等的阿拉伯糖、葡萄糖和甘露糖。
  2.叉枝松藻的冷水提粗多糖CP和熱水提粗多糖HP,首先采用Q-SepharoseFast F low強陰離子色譜柱分離純化,獲得CP1、CP2和HP1三個組分,經(jīng)SephacrylS-400凝膠柱層析進一步純化,得到3個純品多糖組分CP1-1、CP2-1和HP1-1。通過化學方法對多糖的理化性質進行測定,結果表明,CP1-1、CP2-1和HP1-1的總糖含量分別為

4、62.4%、64.8%和78.1%;蛋白含量分別為0.5%、0.4%和3.1%;硫酸基含量分別為30.4%、23.7%和12.3%;糖醛酸含量分別為4.5%、3.2%和6.7%;CP2-1的丙酮酸含量為6.6%。采用高效凝膠滲透色譜法測定三種多糖的分子量分別為203kDa、37.9kDa、297kDa。采用PMP柱前衍生高效液相色譜法測定單糖組成,結果表明,CP1-1主要由阿拉伯糖和半乳糖組成;CP2-1主要含有半乳糖;HP1-1主要含

5、有葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖。另外,采用高效液相色譜法測定多糖中主要單糖種類的絕對構型,阿拉伯糖的絕對構型為L,半乳糖和葡萄糖的絕對構型為D。
  通過紅外光譜、脫硫反應、甲基化后GC-MS分析和1D,2D NMR對多糖結構進行解析,CP1-1、CP2-1和HP1-1的結構各不相同。CP1-1主要含有[→4)-β-L-Arap-(1→]、[→3)-β-D-Galp-(1→]、[β-D-Galp-(1→]和[→3,4)-β-D-Gal

6、p-(→]連接方式,硫酸基取代于1,4連接阿拉伯糖的C-3位和1,3連接半乳糖的C-4位。CP2-1是半乳聚糖,以1,3連接半乳糖為主鏈,含有[→3)-β-Galp-(1→]、[→3,4)-β-Galp-(1→]、[→3)-β-(4SO4)-Galp-(1→]、[β-(3,4-Pyr,6SO4)-Galp-(1→],硫酸基取代于1,3連接半乳糖的C-4位和非還原末端半乳糖的C-6位,丙酮酸在非還原末端半乳糖的C-3和C-4位形成五元環(huán)。

7、HP1-1含有[→4)-α-Glcp-(1→]、[→3)-α-Glcp-(1→]、[→3,4)-α-Glcp-(1→]、[→4)-β-Arap-(1→]、[β-D-(3,4Pyr)-Galp-(1→]、[→3)-β-D-Galp-(1→]多種連接方式,少量硫酸基位于1,4連接葡萄糖的C-3位和1,3連接半乳糖的C-4位。通過APTT、PT和TT,對多糖CP1-1、CP2-1和HP1-1的抗凝血活性進行評價,結果表明,CP1-1、CP2-

8、1和HP1-1均具有體外抗凝血活性,但低于肝素。
  3.采用硫酸對叉枝松藻多糖CP1進行降解,通過薄層色譜法和高效凝膠滲透色譜法對降解產(chǎn)物進行分析,優(yōu)化降解條件。最終選用0.05mol/L硫酸于40℃水浴中降解1.5h和0.01 mol/L硫酸于60℃水浴中降解3h兩種條件對多糖CP1進行降解,采用凝膠色譜Sephacryl S-400分離純化,獲得6個低分子量多糖組分L1~L6,分子量分別為369kDa、242kDa、124k

9、Da、102kDa、43kDa、22kDa。對其進行化學組成分析,6種低分子量多糖均由阿拉伯糖和半乳糖組成,只是單糖的比例有所不同,硫酸基含量在22.5%~29.9%范圍內,與母體多糖的化學組成相似。以抗凝血活性較好、分子量較小的L5為代表,通過GC-MS和1D,2D NMR對L5進行結構解析,結果表明,多糖L5主要含有[→3)-Galp-(1→]、[→4)-Galp-(1→]、[→4)-Arap-(1→]等連接方式,硫酸基位于1,3連

10、接半乳糖的C-2和C-4位,1,4連接半乳糖的C-2位,1,4連接阿拉伯糖的C-3,L5為高度硫酸化的阿拉伯半乳聚糖。采用APTT測定多糖CP1及降解產(chǎn)物L1~L6的抗凝血活性,結果表明,多糖的抗凝血活性隨著分子量的減小而降低,說明一定長度的多糖鏈是必需的,分子量對叉枝松藻多糖的抗凝血活性具有重要影響。
  4.叉枝松藻多糖CP2-1通過三氟乙酸降解,經(jīng)Bio-Gel P4凝膠色譜柱分離純化后,得到8個不同聚合度的寡糖組分F1~F

11、8,并對其純度進行分析。通過負離子模式的電噴霧一級質譜(ES-MS)對寡糖的組成成分進行分析,結果表明,F(xiàn)1~F8為聚合度(DP)在1~11之間的半乳寡糖,且有丙酮酸和硫酸基取代。以純度較高、由G2S組成的F3為代表進行核磁和二級質譜分析,確定其結構為β-D-Galp-(4SO4)-(1→3)-D-Gap,并建立硫酸化半乳寡糖負離子模式下ES-CID-MS/MS二級質譜序列分析方法。將此方法用于其它半乳寡糖的分析,結果表明,獲得的半乳寡

12、糖均通過1→3糖苷鍵相連,硫酸基多數(shù)在1,3連接半乳糖的C-4位,少數(shù)在非還原末端半乳糖的C-6位,丙酮酸在非還原末端半乳糖的C-3和C-4位形成五元環(huán)。通過分析歸屬半乳寡糖的斷裂碎片,建立了半乳寡糖ES-CID-MS/MS二級質譜序列分析方法,有助于多糖及寡糖結構的研究,獲得的半乳寡糖是結構新穎的海洋特征寡糖。
  本論文的研究成果,加深了人們對叉枝松藻多糖結構和活性的認識,為開發(fā)利用叉枝松藻奠定了基礎,豐富了“海洋糖庫”的數(shù)據(jù)

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