礁膜（Monostroma nitidum）多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)和抗凝血活性研究.pdf

1、礁膜(Monostroma nitidum)隸屬于綠藻門，綠藻綱，礁膜科，礁膜屬。多糖是其主要的生物活性物質(zhì)。本文以礁膜為原料，對礁膜多糖進行提取、分離純化，研究其理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和抗凝血活性。 礁膜藻體粉末依次經(jīng)冷水、熱水、稀堿和濃堿液提取，得到五種粗多糖CW、HW1、HW2、AM1和AM2，提取得率分別是9.1％、30.6％、5.3％、5.5％和3.7％，總提取率達54.2％。采用苯酚-硫酸法、硫酸鋇明膠比濁法、薄層層析、氣相

2、色譜、高效液相色譜等方法對其中三種水提取粗多糖CW、HW1和HW2的理化性質(zhì)和單糖組成進行了比較分析。結(jié)果表明：總糖含量HW2最高，CW最低；蛋白含量以CW最高，HW1最低；硫酸基含量以HW1最高，CW最低。三種粗多糖的單糖組成均以鼠李糖為主，含有少量葡萄糖和木糖，CW含有微量甘露糖，HW1含有微量的半乳糖和甘露糖；糖醛酸的類型均為葡萄糖醛酸。 在對粗多糖理化性質(zhì)和單糖組成測定的基礎(chǔ)上，選取HW1作為研究對象，采用離子交換色譜和

3、凝膠排阻色譜相結(jié)合對其進行分離純化得到兩種純化多糖WF1和WF3。采用高效液相色譜法、氣相色譜法、紅外光譜法對兩種多糖的重均分子量、純度及單糖組成進行研究。結(jié)果表明：多糖WF1和WF3經(jīng)SB-804HQ柱洗脫呈單一對稱峰，表明兩種多糖的純度較高，重均分子量分別是870 kD和70 kD，WF1的分子量明顯大于WF3；兩種多糖的單糖組成均以鼠李糖為主，含有少量木糖和葡萄糖，另外，WF1含有微量半乳糖，WF3含有微量甘露糖；糖醛酸類型是葡萄

4、糖醛酸。紅外光譜圖在1250 cm-1左右有S=O的伸縮振動吸收峰，表明了兩種多糖均是帶有硫酸基的鼠李聚糖。 采用脫硫酸基反應(yīng)、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反應(yīng)、氣相色譜、高效液相色譜、紅外光譜、核磁共振波譜和氣質(zhì)聯(lián)用等方法對多糖WF1和WF3的結(jié)構(gòu)進行研究。結(jié)果表明：WF1的糖鏈中是以1，2-Rha為主，含有有1，4和1，3-Rha，硫酸基的位置以C-3、C-4較多，C-2位相對較少，也可能C-3、C-4和C-2均帶有硫

5、酸基。WF3的糖鏈中是以1，3-Rha為主，含有1，2-Rha，存在1→2。3 連接的Rha分支點，硫酸基的位置以C-4位較多，C-2、C-3位相對較少，也可能C-3、C-4和C-2均帶有硫酸基。脫硫前后的紅外譜圖對比解析表明兩種多糖的構(gòu)型為α型。核磁共振譜圖進一步說明WF3是α構(gòu)型，C-3位是糖鏈的連接位點，C-2位、C-4位可能有硫酸基取代。通過活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT)分析，對礁膜多

6、糖WF1和WF3的抗凝血活性進行研究。結(jié)果表明：WF1和WF3對APTT和TT均有延長作用，但對PT作用不明顯，說明WF1和WF3主要抑制內(nèi)源性凝血途徑和/或共有凝血途徑以及抑制凝血酶活性或纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，而對外源性凝血途徑?jīng)]有影響。而且，WF1抗凝血活性明顯高于WF3，這主要是由于它們的分子量、硫酸基含量和結(jié)構(gòu)的差異所引起的。WF1和WF3的抗凝血活性比肝素低。 本研究提取、分離純化得到兩種礁膜多糖WF1和WF3，關(guān)