遼寧堿蓬SINAC2基因克隆及功能分析.pdf

1、分類號：密級：學校代碼：學號：10165201111197遣掌師耗大學碩士學位論文遼寧堿蓬SINAC2基因克隆及功能分析作者姓名：學科、專業(yè)：研究方向：導師姓名：楊星細胞生物學抗逆基因表達調控李秋莉教授2014年05月遼寧師范大學碩士學位論文摘要植物特異性的NAC(NAM、ATAFl／2、CUC)轉錄因子是植物最大的轉錄因子家族之一，在植物的生長發(fā)育和脅迫響應中發(fā)揮重要的作用。遼寧堿蓬生長在海邊，常年遭受高鹽、低溫等非生物脅迫，卻仍然有

2、旺盛的生命力，說明遼寧堿蓬中必然有大量的耐鹽基因。我國北方的大部分地區(qū)常年遭受鹽、低溫、干旱等非生物脅迫，造成了農(nóng)作物產(chǎn)量下降，甚至絕收。因此，挖掘遼寧堿蓬的耐鹽基因，為植物基因工程提供耐逆能力強的基因是十分必要的。從遼寧堿蓬轉錄組數(shù)據(jù)中鑒定出一條NAC基因EST序列，并命名為SlNAC2。利用RACE技術，擴增得到了1458bpSlNAC2eDNA序列(GenBankNoKC460341)，包含一個906bp的開放閱讀框，編碼301個

3、氨基酸，預測SINAC2蛋白的分子量為343kDa，等電點為704。通過SINAC2和其它植物的NAC進行多重序列比對和構建系統(tǒng)進化樹，將SINAC2歸類為ATAF亞家族。初步推測SINAC2響應生物和非生物脅迫。采用qRTPCR的方法，對SlNAC2進行組織表達特性分析，并且分析了鹽、干旱、低溫和ABA脅迫下SINAC2基因在遼寧堿蓬葉中的表達。結果表明，非脅迫條件下，SlNAC2基因在遼寧堿蓬不同組織中的表達情況不同，葉中呈現(xiàn)高表達

4、，莖中其次，根中表達量非常低。在鹽、低溫、干旱、ABA脅迫下，SlNAC2基因的表達都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。SINAC2基因響應鹽、低溫、干旱、ABA脅迫。利用基因槍法將SINAC2GFP轉化洋蔥表皮細胞，發(fā)現(xiàn)SINAC2蛋白定位于洋蔥表皮細胞細胞核中。酵母轉錄激活實驗表明，SINAC2具有轉錄激活活性。這些結果說明SINAC2是轉錄因子。通過蘸花法轉化擬南芥，得到了轉pBI121SINAC2擬南芥T2代植株。耐鹽性分析表明，pBll