遼寧堿蓬SINAC2基因克隆及功能分析.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：10165201111197遣掌師耗大學(xué)碩士學(xué)位論文遼寧堿蓬SINAC2基因克隆及功能分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：楊星細(xì)胞生物學(xué)抗逆基因表達(dá)調(diào)控李秋莉教授2014年05月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要植物特異性的NAC(NAM、ATAFl／2、CUC)轉(zhuǎn)錄因子是植物最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，在植物的生長(zhǎng)發(fā)育和脅迫響應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。遼寧堿蓬生長(zhǎng)在海邊，常年遭受高鹽、低溫等非生物脅迫，卻仍然有

2、旺盛的生命力，說(shuō)明遼寧堿蓬中必然有大量的耐鹽基因。我國(guó)北方的大部分地區(qū)常年遭受鹽、低溫、干旱等非生物脅迫，造成了農(nóng)作物產(chǎn)量下降，甚至絕收。因此，挖掘遼寧堿蓬的耐鹽基因，為植物基因工程提供耐逆能力強(qiáng)的基因是十分必要的。從遼寧堿蓬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中鑒定出一條NAC基因EST序列，并命名為SlNAC2。利用RACE技術(shù)，擴(kuò)增得到了1458bpSlNAC2eDNA序列(GenBankNoKC460341)，包含一個(gè)906bp的開(kāi)放閱讀框，編碼301個(gè)

3、氨基酸，預(yù)測(cè)SINAC2蛋白的分子量為343kDa，等電點(diǎn)為704。通過(guò)SINAC2和其它植物的NAC進(jìn)行多重序列比對(duì)和構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，將SINAC2歸類(lèi)為ATAF亞家族。初步推測(cè)SINAC2響應(yīng)生物和非生物脅迫。采用qRTPCR的方法，對(duì)SlNAC2進(jìn)行組織表達(dá)特性分析，并且分析了鹽、干旱、低溫和ABA脅迫下SINAC2基因在遼寧堿蓬葉中的表達(dá)。結(jié)果表明，非脅迫條件下，SlNAC2基因在遼寧堿蓬不同組織中的表達(dá)情況不同，葉中呈現(xiàn)高表達(dá)

4、，莖中其次，根中表達(dá)量非常低。在鹽、低溫、干旱、ABA脅迫下，SlNAC2基因的表達(dá)都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。SINAC2基因響應(yīng)鹽、低溫、干旱、ABA脅迫。利用基因槍法將SINAC2GFP轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)SINAC2蛋白定位于洋蔥表皮細(xì)胞細(xì)胞核中。酵母轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)表明，SINAC2具有轉(zhuǎn)錄激活活性。這些結(jié)果說(shuō)明SINAC2是轉(zhuǎn)錄因子。通過(guò)蘸花法轉(zhuǎn)化擬南芥，得到了轉(zhuǎn)pBI121SINAC2擬南芥T2代植株。耐鹽性分析表明，pBll